Regulación de la angiogénesis y la apoptosis ovárica por análogos de GnRH

RODRIGUEZ CELIN ALEJANDRA; TESONE MARTA; PARBORELL FERNANDA

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La angiogénesis, el desarrollo y la atresia folicular cumplen un papel fundamental en la función ovárica. En estudios previos, se observó un aumento en la apoptosis y en la expresión de caspasa-3 en folículos ováricos provenientes  de ratas inmaduras superovuladas tratadas con un agonista de GnRH. Para dilucidar si estos cambios se correlacionaban con una disminución en la vascularidad de los folículos, llevando a éstos a la atresia, se evaluó el efecto de los análogos de GnRH sobre la expresión ovárica de dos factores proangiogénicos: VEGF-A y ANGT-1 en el modelo mencionado anteriormente. Además, se evaluó la actividad de caspasa-3. Ratas prepúberes superovuladas con eCG (grupo control) se inyectaron durante 48 hs, cada 12 hs con GnRH-a (agonista, Acetato de Leuprolide, 1µg/rat/day, grupo LA) y/o GnRH-ant (antagonista, Antide, 10 ug/rat/day; grupo LA+Ant o grupo Ant). Folículos antrales (FA) sanos se aislaron por microdisección. Las proteínas de FA se aislaron para western blot para medir los niveles de VEGF-A y ANPT-1. Además, se realizó inmunohistoquímica (IHQ) en cortes de ovario para evaluar la localización de estos factores angiogénicos. El grupo LA mostró una disminución significativa (unidades arbitrarias) en los niveles proteicos de VEGF-A y ANPT-1 comparado al grupo control (VEGF-A C:241.81±17.26, LA:149.8±10.13; ANPT-1 C: 466.1±33.9, LA: 235.9±48.8; p<0.05).  La co-inyección del Antide interfirió con el efecto de LA (VEGF-A LA: 149.8±10.13, LA+Ant: 200±6.5; ANPT-1 LA: 235.9±48.8, LA+Ant: 499±37; p<0.05). Los análisis de IHQ mostraron que en todos los grupos, las células de granulosa (CG) y tecales (CT) de folículos preantrales (FP) exhiben una ausente o moderada señal para ANGT-1. En el grupo LA, las CG y CT de folículos antrales (FA) mostraron una leve inmunoreactividad para ANGT-1 comparada a los grupos restantes, teniendo éstos en cambio, una intensa señal para esta proteína. Además, se determinó la actividad de caspasa-3 en los FA provenientes de los distinos grupos experimentales. En el grupo LA, se observó un aumento significativo en la actividad de caspasa-3 comparado al grupo control (p<0,05). La co-inyección del Antide interfirió con el efecto de LA sobre la actividad de ésta. Conclusión: La disminución de la expresión de VEGF-A y ANGT-1 y el aumento de la actividad de caspasa-3 por LA, sugieren una posible disminución de aporte sanguíneo a los folículos, conduciéndolos a la atresia; o una posible falta del efecto citoprotector directo de estos factores sobre las células foliculares.