• La expresión del rH2 a histamina atenúa la señalización de otro GPCR acoplado a la misma vía. Evidencias experimentales de la existencia de una especie del receptor inactiva acoplada a la proteína G

TUBIO MARIA ROSARIO, SHAYO CARINA C, DAVIO CARLOS A, MONCZOR FEDERICO

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

SAIC

El receptor H2 a histamina (rH2) pertenece a la familia de receptores acoplados a proteínas G, transduciendo su señal a través de la proteína Gs. Previamente hemos descripto que ciertos agonistas inversos del rH2 son capaces de inducir una conformación inactiva del receptor capaz de secuestrar proteína G y en consecuencia atenuar la señalización de otros receptores acoplados a la misma vía.El objetivo de este trabajo es determinar si la especie del receptor inactiva pero acoplada a proteína G existe en la membrana celular independientemente de la presencia de ligandos. Para ello, evaluamos si la expresión del rH2 es capaz de interferir en la señalización de otros receptores. Por transfección estable con cDNA del rH2 en células CHO, sin rH2 endógeno, obtuvimos clones que expresan distintas cantidades de receptor, llamados CHO-H2L y CHO-H2H (27,1±0,4 y 0,65±0,02 fmol/mg de prot. respectivamente). Por ensayos concentración-respuesta con los ligandos: amthamina, tiotidina, famotidina, ranitidina y cimetidina, determinamos la funcionalidad del rH2. Los parámetros de las respuestas se correlacionan con el número de receptores expresados en cada clon.Evaluamos la interferencia del rH2 en la señalización del receptor a calcitonina (CT) que se expresa endógenamente en las células CHO. Mediante ensayos concentración-respuesta con CT, determinamos que la expresión del rH2 afecta la respuesta a CT disminuyendo su Rmáx en forma dependiente de la cantidad de rH2 expresada sin modificar la CE50 (Rmáx: 79,4±1,8; 53,7±1,5; y 25,1±1,1 pmol; pCE50: 10,2±0,1; 10,9±0,1; y 10,1±0,2 en CHO, CHO-H2L, y CHO-H2H, respectivamente). Este efecto fue revertido por la sobreexpresión de proteína Gs.Estos resultados indican que la sobreexpresión del rH2 atenúa la señalización mediada por CT, de un modo dependiente de la cantidad de rH2 expresado. Mediante el secuestro de proteína G, el rH2 limita el acceso de otros receptores a la proteína Gs.