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Los espermatozoides bovinos criopreservados son ampliamente utilizados en tecnologías reproductivas, pero la criopreservación afecta negativamente su calidad. Las gametas funcionales deben ser seleccionadas para optimizar el rendimiento de las muestras. El objetivo del trabajo fue evaluar la efectividad del método de filtración por columnas de lana de vidrio (LV) para seleccionar espermatozoides de alta calidad funcional a partir de muestras de semen bovino criopreservado. Se utilizaron muestras criopreservadas de 6 toros Holstein, descongeladas y filtradas por columnas de lana de vidrio (LV). Inmediatamente luego del descongelado, se determinaron los parámetros espermáticos de rutina y luego de la selección se volvieron a evaluar, determinándose además el estado del acrosoma y el de capacitación. En paralelo, se seleccionaron usando swim up (SU) y se compararon los valores de estos parámetros con ambas técnicas. Sobre los recuperados en el filtrado se evaluó la respuesta a la incubación en condiciones capacitantes, la exocitosis acrosomal (EA) y la capacidad de fecundar complejos ovocitos cumulus (COCs) y ovocitos desnudos. Las muestras separadas por LV mostraron % de viabilidad, de motilidad progresiva y vigor superiores a las recuperadas por SU (n=36; p<0,05). El método de filtración condujo a una recuperación del 67 ± 19 % de espermatozoides mótiles en comparación con el 18 ± 8 % obtenido con SU (n=16; p<0,05). La LV permitió la separación de mayor % de espermatozoides no capacitados (patrón F; ensayo de clortetraciclina) y de mayores % de espermatozoides con acrosoma intacto (tinción con aglutinina de Pisum sativum; p<0,05). Los espermatozoides recuperados por LV fueron capaces de: 1) sufrir cambios asociados a la capacitación espermática (45 min con heparina); 2) sufrir la EA en respuesta a inductores farmacológicos (ionóforo de calcio A23187 y lisofosfatidilcolina) y fisiológicos (fluido folicular bovino 30%); 3) fecundar COCs madurados in vitro y ovocitos desnudos (embriones de 2 células: 72±4 % (n=150) y 52±6 % (n=144), respectivamente). En conclusión, la filtración por LV es un procedimiento económico, simple y altamente efectivo para seleccionar espermatozoides funcionalmente competentes para ser usados en procedimientos de reproducción asistida en bovinos y otras especies de interés zootécnico, domésticas y/o en peligro de extinción. Palabras clave: espermatozoide / bovino / fecundación / lana de vidrio. Tópico temático: REPRODUCCION (RE)