Uso de cultivos tridimensionales en Matrigel para ensayar in vitro la sensibilidad diferencial de tumores mamarios con distinta dependencia hormonal.

POLO M. L; MARIA VICTORIA ARNONI; MARINA RIGGIO; VICTORIA WARGON; CLAUDIA LANARI; VIRGINIA NOVARO

Buenos Aires

Jornada; XXVI JORNADAS NACIONALES DE ONCOLOGIA; 2010

INSTITUTO “ÁNGEL H. ROFFO”

Introducción y antecedentes: La terapia hormonal es la estrategia más utilizada en el tratamiento de los tumores mamarios que expresan receptores de estrógeno (ER) y de progesterona (PR). Uno de los mayores obstáculos que afronta esta terapia es el desarrollo de resistencia endócrina presentada por un alto porcentaje de pacientes. Numerosos estudios señalan a la sobreactivación de las vías de fosforilación acopladas a los receptores de factores de crecimiento como uno de los mecanismos por los cuales se desarrolla la independencia y la resistencia hormonal. Estudios previos realizados por nuestro laboratorio en un modelo de carcinomas mamarios murinos inducidos por acetato de medroxiprogesterona (MPA), asocian a la sobreactivación de la vía PI3K/AKT como uno de los eventos claves en el surgimiento de la variante tumoral hormono independiente C4-HI. Objetivo: Utilizar un sistema de cultivo tridimensional (3D) que permita reproducir in vitro la arquitectura del tejido tumoral, para estudiar la participación de vías de señalización particulares en variantes tumorales con distinta dependencia hormonal. A partir de la detección de dichas vías determinar la sensibilidad diferencial de las variantes tumorales a agentes antitumorales específicos. Materiales y métodos: Mediante western blot e inmunohistoquímica analizamos in vivo el nivel de activación de las vías de señalización PI3K/AKT y MAPK/ERK en la variante tumoral hormono dependiente C4-HD, que necesita el agregado de MPA para crecer, y en la variante tumoral hormono independiente C4-HI, que crece aún en ausencia del MPA. Asimismo, se evaluó el efecto del LY294002 y PD98059 (inhibidores de las vías PI3K/AKT y MAPK/ERK, respectivamente) sobre el crecimiento tumoral. Realizamos la detección de muerte y diferenciación celular in vitro cultivando a las células tumorales sobre Matrigel (cultivo tridimensional, 3D), donde se comparó la sensibilidad de ambas variantes tumorales a los antagonistas de ER (ICI182780) y de PR (ZK230211) y a los inhibidores de quinasas. Resultados: La sobre-activación de la vía PI3K/AKT representa uno de los eventos claves en la progresión hacia la hormono independencia. El tratamiento con LY294002 produjo regresión tumoral únicamente en los tumores C4-HI, mediante un aumento en el índice apoptótico y una mayor diferenciación tisular, lo cual indica que los tumores C4-HI se vuelven ¨adictos¨ a la vía de PI3K/AKT. Estas diferencias fueron reproducidas in vitro al cultivar las células tumorales en Matrigel. A su vez, en los cultivos 3D las células C4-HD mostraron una mayor sensibilidad al tratamiento con ICI182780 y ZK230211 que los cultivos C4-HI, tal como se había reportado en los tumores correspondientes. La mayor sensibilidad frente a los antagonistas hormonales que poseen los tumores C4-HD indica que, en estos tumores, la proliferación y la supervivencia celular está regulada principalmente por las vías de señalización asociadas a los receptores esteroides. Conclusiones: El sistema de cultivo 3D reprodujo el fenotipo y sensibilidad diferencial observado in vivo entre los tumores C4-HD y los tumores C4-HI por lo cual constituye un modelo preclínico óptimo en el estudio de agentes antitumorales específicos aplicados a cada variante tumoral.