Spatio-temporal analysis of the protein expression of angiogenic factors and their related receptors during folliculogenesis in rats with and without hormonal treatment.

ABRAMOVICH DALHIA; RODRIGUEZ CELIN ALEJANDRA; HERNANDEZ FATIMA; TESONE MARTA; PARBORELL FERNANDA

Reproducción

Sociedad Argentina de Medicina Reproductiva (SAME)

Año: 2010 p. 43 - 45

En el adulto, el ovario es uno de los pocos órganos donde ocurre el desarrollo, mantenimiento y regresión de vasos sanguíneos. Si bien los folículos preantrales no poseen vasculatura propia a medida que el antro se desarrolla durante la foliculogénesis, el tejido tecal adquiere vasculatura en forma de dos redes capilares en la teca externa e interna. Se ha postulado que el desarrollo y crecimiento de estos capilares estaría controlado por factores angiogénicos producidos por las células de granulosa. Estos factores actuarían en forma conjunta, estimulando el crecimiento y mediando la reorganización de células endoteliales en estructuras vasculares más complejas. Entre estos factores, se destacan el VEGF (factor de crecimiento del endotelio vascular), Angiopoyetina 1 (ANGPT1) y Angiopoyetina 2 (ANGPT2). Los defectos en la angiogénesis ovárica pueden contribuir a una variedad de desórdenes como la anovulación e infertilidad, la pérdida de embarazo, el síndrome de hiperestimulación ovárica (OHSS), la poliquistosis ovárica (PCOS) y los neoplasmas ováricos. Una de las características que poseen tanto las pacientes con OHSS como con PCOS, es una angiogénesis alterada donde se observan niveles elevados de VEGFA en suero y fluido folicular. El OHSS es una complicación iatrogénica severa del crecimiento y maduración folicular ocasionada por la inducción de la ovulación con gonadotrofinas en tratamientos de fertilización asistida (Assistant Reproductive Technics, ART). Las características de la enfermedad involucran: aumento en el tamaño del ovario, sobreproducción de hormonas esteroideas y sustancias como citoquinas, angiotensina y VEGF, contribuyendo de esta manera al aumento de permeabilidad vascular, presencia de ascitis y formación de quistes. Estos quistes son de tejido luteal y hemorrágicos, y probablemente el mecanismo se deba o bien a un aumento de la proliferación/diferenciación de las células foliculares o a la  inhibición de la apoptosis. El VEGF es  el principal candidato involucrado en la patogénesis de OHSS. El PCOS, por su parte, afecta a un 5 a 10 % de las mujeres en edad reproductiva causando infertilidad y se caracteriza porque las pacientes presentan alteraciones endocrinas, metabólicas y reproductivas. Los principales signos y síntomas son hiperplasia de la teca interna y del estroma con excesiva producción de andrógenos, hirsutismo, obesidad, resistencia a insulina, fertilidad disminuida y ovarios poliquísticos hipertrofiados. A pesar de que este síndrome fue descripto hace más de 50 años, aún no se conoce exactamente su etiología. Varios estudios demuestran que las pacientes con PCOS tienen altos niveles de VEGFA en suero y se cree que este factor proviene de una elevada producción ovárica. Se ha demostrado que las mujeres que presentan PCOS tienen aumentado el flujo sanguíneo del estroma ovárico y que esto estaría relacionado al aumento sérico de VEGFA. Además existen mayores niveles de VEGFA en fluido folicular de pacientes con PCOS comparadas con pacientes control. Cabe destacar, que las mujeres que presentan PCOS, tienen mayor riesgo de desencadenar OHSS cuando son sometidas a técnicas de fertilización asistida y esto estaría relacionado al aumento de la permeabilidad vascular dada por los altos niveles de VEGFA ováricos y séricos descriptos en estas pacientes. Todas estas características estarían indicando que la angiogénesis juega un rol muy importante en el desarrollo de estas patologías. Por lo tanto, el conocimiento de la función de los factores angiogénicos, VEGF y ANGPTs, tanto en la fisiología como en la patología ovárica, tendría implicancias de importancia en el tratamiento de los desordenes ováricos que presentan una angiogénesis alterada. Es por esto que decidimos estudiar la expresión proteica y la localización celular de ANGPT1, ANGPT2 y su receptor TEK, así como el factor de crecimiento vascular endotelial A (VEGFA) y su receptor KDR (VEGFR2) durante la foliculogénesis. Para obtener folículos en diferentes estadios para inmunohistoquímica y análisis western inmunoblot utilizamos ratas prepúberes no tratadas, y tratadas con dietilestilbestrol y gonadotrofina coriónica equina. Para confirmar que estos tratamientos hormonales reflejan cambios fisiológicos usamos ratas no tratadas adultas. No se observó expresión de ANGPT1 en las células granulosas (Gc) de ratas inmaduras tratadas y no-tratadas en ningún estadio de la foliculogénesis. En contraste, la expresión de ANGPT1 en las células de la teca (Tc) aumentó con la maduración folicular. La proteína ANGPT2 estuvo o ausente o pobremente expresada en las Gc en todos los estadios foliculares. En las Tc, se detecto mínima expresión de ANGPT2 en el folículo preantral (PF), mientras que era más intensa en el folículo antral temprano (EAF) y en el preovulatorio (POF). El marcado para TEK estuvo ausente en las Gc pero fue intenso en las Tc en cada estadio folicular. El marcado para VEGFA fue débil o inexistente en las Gc y Tc en los PF y EAF, aunque en los POF fue más intensa en las Gc y Tc. El marcado para KDR estuvo ausente en las Gc y fue muy tenue en las Tc de los PF. Las Gc y las Tc de los EAF fueron positivas para el marcado para KDR y en los POF fue más intenso. Estos resultados se confirmaron por Western inmunoblot. Se observó un patrón semejante de expresión de estas proteínas en las ratas adultas. En conclusión, observamos que la expresión de las proteínas ANGPT1, ANGPT2, VEGFA y sus receptores aumentaba durante el desarrollo folicular en las ratas.