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Las técnicas de medición de actividad eléctrica celular por fluorescencia han sido ampliamente desarrolladas en los últimos años. A partir del descubrimiento de moléculas cuyas propiedades de absorción y emisión de fotones cambian de acuerdo al campo eléctrico circundante, fue posible medir cambios en el potencial de la membrana celular, especialmente en células que generan potenciales de acción. Sin embargo, a pesar de las ventajas que el método ofrece con respecto al aumento en la resolución espacial, la dinámica del cambio en los niveles de fluorescencia y la velocidad de los equipos actuales de adquisición de imágenes imposibilitan el registro de señales de alta frecuencia. Determinar la propagación del frente de despolarización en el tejido cardíaco con imágenes de fluorescencia. En este trabajo utilizamos Di-4-anneps, un marcador fluorescente cuyas propiedades de absorción/emisión cambian con el potencial de membrana, para registrar el avance del potencial de acción cardíaco in-vitro. Para aumentar la resolución temporal se implementó un sistema de adquisición en tiempo equivalente, aprovechando la estacionareidad del avance del frente de onda de la despolarización. Se utilizaron ratas Whistar, las cuales fueron anestesiadas con Ketamina y Xilacina intravenosos y luego ventilados mecánicamente. Los corazones fueron rápidamente removidos y sumergidos en solución Tyrode fría y oxigenada. Mediante una disección se obtuvieron trozos de tejido de 5 x 5 x 1 mm de la superficie epicárdica y endocárdica del ventrículo izquierdo. Los tejidos fueron colocados en un baño perfundidos con solución Tyrode equilibrada a pH 7.4. La temperatura se mantuvo a 37 ± 0.5°C. Se determinó el frente de avance del potencial de acción cardíaco con una resolución temporal de 2 milisegundos y se estimó la velocidad de propagación del mismo en 0.45 +/- 0.03 m/s, aún con un incremento de señal netos (deltaF/F) de alrededor del 5%. Con el método de muestreo en tiempo equivalente se pudo determinar las variaciones espaciales y temporales del frente de despolarización con una precisión espacial de 50 um y temporal de 2 milisegundos.