El curso está dirigido a médicos, veterinarios, químicos, biólogos, bioquímicos y de carreras afines que ya graduados necesiten una óptica de las patologías humanas con una mirada que articule la clínica con la investigación aplicada. Los distintos temas se abordan desde la fisiología hasta las patologías asociadas.

Curso intensivo de dos semanas con una carga horaria de teóricos de 48 hs. y de prácticos de 48 hs. Para su aprobación el curso tiene un examen final obligatorio. Tiene una carga horaria de prácticas de laboratorio y de seminarios que deben ser preparados por los alumnos (la parte práctica es de 48 hs. totales) Las clases prácticas son aquellas que resultan imprescindibles para el médico y/ó investigador científico. Se dicta 1 vez al año, preferentemente en el primer trimestre de cada.

contador de centelleo beta Perkin Elmer Tri-Carb 2800 TR | Espectrofotómetro Bio-Rad Microplate Reader 3550 | Termociclador para RT-PCR Ivema Desarrollos SRL T 18 | Centrifuga Refrigerada Nicolet RC 5B | Equipo de Western Blot Bio-Rad Power pak 200 | pileta automática Eppendorf volúmen variable de 20, 200 y 1000ul

Ciencias Médicas

MEDICINA-VARIAS

Enfermedades no endemicas

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

foliculogénesis, cuerpo lúteo, ovario
toxicidad ambiental, ovulación, utero
síndrome del ovario poliquistico,
síndrome de hiperestimulación ovárica
patologías espermáticas, sistema inmune

El curso dirigido a médicos, veterinarios, químicos, biólogos, bioquímicos y de carreras afines que ya graduados necesiten una óptica de las patologías humanas con una mirada que articule la clínica con la investigación aplicada. Los distintos temas se abordan desde la fisiología hasta las patologías asociadas

8 clases teóricas de 8 horas de duración, 1 clase de 8 horas teórico-práctica y 1 clase de exámen final. Entrega de certificados de asistencia y/o aprobación (con nota final).

Ciencias Médicas

FARMACOLOGIA-OTRAS

Salud humana

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

Reproducción
Farmacología
Espermatozoide-Oviducto
Implantación
Placenta

El efecto pro-angiogénico de reactivos biológicos como el pCMVrhVEGF165 puede evaluarse por medio de un ensayo in vitro que implica la transfección de células humanas que no expresan esta proteína. Por medio de la transfección de células normales de mama humana MCF-10A que no sintetizan VEGF con pCMVrhVEGF165 evaluaremos el nivel de expresión de esta proteína en lisados y sobrenadantes de células MCF-10A en cultivo, lo que correlaciona con el potencial angiogénico de dichas células

Transformación térmica de bacterias DH5 alfa; competentes con el plásmido pCMVrhVEGF165 o el plásmido pCMV control sin inserto.Purificación, cuantificación y transfección del plásmido pCMVrhVEGF165 o el plásmido control en células de la línea normal de mama humana MCF-10A. Evaluación del nivel de expresión de VEGF-A en sobrenadantes y lisados de las líneas celulares estables generadas . Elaboración del informe final.

Se utilizará un stock de bacterias DH5 alfa competentes generadas por el método de Inoue y serán almacenadas a -80ºC. Se transformarán utilizando un protocolo de shock térmico a 42ºC y 100 ng del plásmido pCMVrhVEGF165 o el plásmido pCMV control sin inserto. Se incubará 1 hora a 37ºC en medio LB y se sembrará en placas LB agar con el antibiótico de selección. Las colonias se amplificarán y se purificará el DNA plasmídico por maxi preparación por lisis alcalina con SDS. Se cuantificará utilizando un nanodrop y se verificará la pureza y calidad por digestión con enzimas de restricción y corrida en geles de agarosa al 1% con bromuro de etidio. Se preparará una batería de soluciones seriadas del plásmido pCMVrhVEGF165 y otra batería con el plásmido vacío en PBS estéril. Luego se realizará la transfección en células de la línea normal de mama, MCF-10A. Para ello, se sembrarán 5x106 células/placa de 100mm en 10 ml de medio DMEM:F12 suplementado con 10% de suero fetal bovino y 1 % de glutamina sin antibiótico. Al día siguiente se adicionará la mezcla de las diluciones del plásmido en OPTI-MEN, NaCl y polietilenimida (PEI). Luego de la generación de las líneas celulares estables se evaluarán los niveles de expresión de la proteína secretada al sobrenadante y en los lisados celulares. Para ello se recolectarán los sobrenadantes a 24, 48 y 72 horas y los correspondientes extractos celulares y se realizará la extracción de proteínas. La concentración proteica se determinará por el método de Bradford, las muestras se sembrarán en geles de SDS-poliacrilamida al 12% y se someterán a electroforesis. Las membranas de nitrocelulosa se incubarán con un anticuerpo anti-VEGF-A humano de conejo y un anticuerpo secundario anti-conejo acoplado a HRP. Las bandas se visulalizarán en placas autorradiográficas por quimiolumniscencia (ECL) y se cuantificarán con el programa Image J. Los resultados se expresarán como promedios de cada grupo +/- ES

Scanner Epson Stylus TX210 | Centrifuga refrigerada Termo Legend micro 17R | notebook Hewlett Packard pavilion entertaiment | Fuente de poder Bio-Rad 200/2.0

Ciencias Médicas

MEDICINA

Enfermedades no endemicas-Otros

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

angiogenesis
VEGF-A

El curso está dirigido a quienes deseen especializarse en fisiología, patología y farmacología de la inflamación. El curso consta de clases teóricas y seminarios en los que se analizan trabajos científicos relacionados con los temas. El dictado está a cargo del responsable del curso o del invitado en cuestión, los que discutirán casos clínicos o problemas teóricos.

A cada alumno se le brindará el material impreso con diapositivas mostradas en clase, y una copia impresa del seminario la semana anterior a la discusión del mismo. Como así también de un disco compacto con los seminarios y las clases teóricas del curso completo. Se realizará la exposición del trabajo científico (seminario) por parte del alumno, el análisis y la discusión. Examen escrito. Cada clase constará de una exposición teórica más un seminario de discusión. Posee una carga horaria 1.5 horas cada uno. El objetivo es que se realice una presentación general del tema de manera de situar a los alumnos y posteriormente se desarrolla el tema desde un enfoque clínico y/o experimental, donde se presentará en el caso que hubiera, los resultados correspondientes al laboratorio al que pertenece el orador. Los oradores serán referentes en los temas en cuestión. Los seminarios se estructuran de manera que los alumnos se separen en grupos pequeños y que cada grupo exponga un trabajo científico que haya sido publicado en una revista de alto impacto y que demuestre claramente los puntos más importantes del tema teórico en cuestión.

notebook Hewlett Packard pavilion entertaiment | fotocopiadora toshiba 1210 | impresora laser Samsung CLP 315

Ciencias Médicas

MEDICINA-INMUNOLOGIA

Enfermedades no endemicas-Otros

Servicios de enseñanza n.c.p.

Inflamación
Farmacología
Inmunología

el efecto citotóxico de fármacos de síntesis o principios naturales puede evaluarse por medio de un ensayo in vitro que implica la reducción del compuesto MTT a formazan un compuesto coloreado, cuando las células están metabólicamente activas. Si el/los compuestos a ensayar producen la lisis celular no se produce dicha reducción química.

Las células tumorales o normales (de igual estirpe, para usar concentraciones del fármaco que tengan efecto únicamente sobre las células tumorales) se tratan con concentraciones crecientes del fármaco durante distintos tiempos. La potencia del fármaco se evalúa por comparación con un fármaco patrón de efecto citotóxico conocido. El efecto citotóxico de los fármacos sobre las células tumorales se evalúa colorimétricamente en un lector de ELISA. Elaboración del informe final.

a) Las células blanco (tumorales y normales de distintas estirpes) se cultivan en monocapa en frascos (T75) en medio mínimo esencial de Eagle (D-MEM) (Invitrogen Inc., Carlsbad, CA, USA) suplementado con L-glutamina 2 mM, gentamicina 80 ug/ml y suero fetal bovino (SFB) al 10% (PA/Bioser, Bioser S.A., Barcelona, España) hasta confluencia. Luego, la monocapa se despega con solución de tripsina al 0,25%, EDTA al 0,02 % en PBS libre de Ca2+ y Mg2+. b) Se siembran 104 células/pozo en placas de 96 pozos en medio de cultivo D-MEM con 5% de SFB. c) Se dejan adherir durante 4 h a 37°C. d) Las células se deprivan de suero fetal bovino y se tratan con el compuesto a ensayar en 8 concentraciones diferentes y se ensayan 3 tiempos de tratamiento. d) De igual forma se procede con una droga antitumoral utilizada como patrón para obtener por comparación la potencia de la droga a ensayar. Siempre se cultivan en paralelo controles sin tratamiento. Concluido el tiempo de tratamiento, se reemplaza el medio por medio fresco. e) Se utiliza el ensayo colorimétrico basado en el uso del compuesto MTS (Promega, Madison, WI, USA). Este reactivo se acopla al metilsulfato de fenacina (PMS) y se reduce a formazan. Se reemplaza el medio de cultivo de las células por medio fresco y después de 48 horas se descartan los sobrenadantes y las células viables se detectan agregando 20 ul MTS:PMS (20:1) a cada pozo. Después de 2 horas a 37°C, se evalúo la producción de formazan midiendo la absorbancia a 490 nm en un lector de ELISA computarizado (Bio-Rad Laboratories, Inc. Oakland, CA, USA). Cada punto experimental se ensaya por triplicado y los resultados son promedios ± E.S. que se expresan como porcentaje con respecto al control no tratado (basal).

LECTOR DE ELISA BIO TEK instruments MQX200

Ciencias Médicas

FARMACOLOGIA-VARIAS

Salud humana

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

farmacología
efectos citotóxicos
células tumorales

El efecto antitumoral de fármacos se evalúa por inoculación de células tumorales humanas en ratones inmunosuprimidos. Cuando el tumor es palpable (aprox. día 7 de portación) los animales se tratarán con el fármaco a ensayar (1 dosis/semana o repartiendo la dosis semanal en 3 administradas i.p. cada 48 h según la fármacocinética de la droga, durante 4 semanas). Se evaluará el crecimiento tumoral midiendo dos diámetros del tumor/48 h y se calculará el volumen y la masa tumoral (por pesada).

Amplificación in vitro de las células tumorales humanas. Inoculación de las células en ratones NUDE. Tratamiento de los portadores de tumor con el fármaco a ensayar o la droga patrón de efecto conocido. Evaluación del crecimiento tumoral durante 1 mes.

Amplificación de las células humanas (tumoral y normal) in vitro hasta obtener 4x107 células. Luego de un lavado con medio de cultivo D-MEM:F12 (1:1) se ajusta la concentración celular (4x106 células/ml) en D-MEM y se inoculan 0,1 ml de la suspensión por vía subcutánea en el flanco de ratones NUDE según metodología previamente desarrollada por nuestro grupo. A partir de que el tumor es palpable (aproximadamente al día 7 de portación) los animales se tratarán con el compuesto a ensayar según un esquema prefijado en forma intraperitoneal (1 dosis A administrada semanalmente durante 4 semanas o dosis A repartida en 3 administradas cada 48 h según características farmacocinéticas de la droga a ensayar). Desde el comienzo del tratamiento los animales deben ser evaluados de la siguiente forma: medición de 2 diámetros del tumor con calibre. Este procedimiento se realiza cada 48 h durante aproximadamente 30 días. El tamaño del tumor no debe superar en peso el que corresponde al 10 % del peso del portador. Los protocolos para el manejo de los animales son certificados por la CICUAL (Facultad de Medicina, UBA). Cada grupo experimental cuenta con 10 animales y se incluyen grupos sham y portadores de tumor sin tratamiento. Al finalizar el ensayo se pesan los tumores y se calculan la toma tumoral y los volúmenes tumorales a partir de los diámetros medidos con calibre durante todo el ensayo. Los resultados se expresan como promedios de cada grupo±E.S.

Ciencias Médicas

FARMACOLOGIA-VARIAS

Salud humana

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

drogas antitumorales
crecimiento tumoral
angiogénesis

Determinación de la concentración de hormonas esteroideas (corticosterona, cortisol, progesterona, aldosterona, testosterona o estradiol) en muestras de suero obtenidas de animales de experimentación o en medios de cultivo de células esteroidogénicas mediante radioinmunoensayo (RIA).

Se recibirán las muestras (suero o medio de cultivo) en tubos de plástico de tipo Eppendorf (aprox. 100 ul). En el caso de la determinación de esteroides contenidos en suero, éstos se extraerán del mismo con solventes orgánicos adecuados (diclorometano, ciclohexano, etc.) previo a la determinación. Los medios de cultivo se procesarán directamente. La técnica de RIA se basa en la competencia entre un ligando contenido en una muestra y la misma molécula marcada radioactivamente por la unión a un anticuerpo específico. Una vez alcanzado el equilibrio, se separa la fracción unida al anticuerpo del ligando libre y se determina la radioactividad contenida en la primera. La concentración hormonal se calcula por comparación con una curva estándar realizada en las mismas condiciones con un esteroide patrón.

Ciencias Médicas

CIENCIAS MEDICAS

Salud humana

Investigación y desarrollo experimental en el campo de las ciencias médicas

Radioinmunoensayo
Corticosterona
Progesterona
Cortisol
Aldosterona

PCR en tiempo real es una técnica de alta sensibilidad utilizada para la cuantificación de ADN o ARN en una muestra dada empleando cebadores específicos. El servicio consiste en la utilización de un equipo para PCR en tiempo real por usuarios con experiencia en el mismo, supervisados por personal del instituto.

El termociclador (Rotor Gene 6000, Corbett Life Science) es un aparato con capacidad para calentar y enfriar rápidamente las muestras de estudio. Dicho equipo detecta la fluorescencia emitida por cada muestra en cada ciclo estableciendo un gráfico de fluorescencia versus ciclos de PCR.

Ciencias Médicas

MEDICINA-VARIAS

Salud humana

Servicios relacionados con la salud humana n.c.p.

PCR en tiempo real
qPCR