Posible participación de la anandamida en las vías de señalización asociadas a la capacitación espermática en bovinos

MARÍA GRACIA GERVASI, CARMEN LLADOS, CLAUDIA OSYCKA, MANUEL VILLALÓN Y SILVINA PEREZ-MARTINEZ

San Pablo, Brasil

Congreso; XXI Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana; 2009

Justificativa: Previamente demostramos en un modelo bovino, que concentraciones nanomolares de anandamida (AEA) o Met-AEA (análogo estable de AEA) promueven la liberación de los espermatozoides (ESP) que se encuentran unidos a las células epiteliales del oviducto (CEO) mediante la activación de los receptores CB1 y TRPV1. Además, estudios de capacitación espermática in vitro revelaron que la Met-AEA capacita a los ESP, siendo esta la posible causa de su liberación de las CEO. Objetivos: Dado que la capacitación espermática se asocia al aumento en los niveles de calcio intracelular estudiamos si la AEA induce cambios en los niveles de calcio intracelular en ESP bovinos en co-cultivo con CEO. Metodología: Se realizaron co-cultivos ESP-CEO con ESP previamente incubados con FURA2-AM. Luego de 1 h de co-cultivo se adquirieron imágenes fluorescentes (F=340/380 nm) seriadas de los ESP, con un microscopio acoplado a un sistema de adquisición de imágenes digitales. Los cambios en la fluorescencia, asociados a los cambios en los niveles de calcio intracelular, se expresaron como área bajo la curva (ABC). Se adquirieron imágenes por 2 min en medio sp-TALP (basal) y por 5 min luego de la adición de distintos agonistas y/o antagonistas de los receptores CB1 y TRPV1. Resultados: La proporción de ESP que aumentó los niveles de calcio fue similar en la población de ESP del control como en la de los tratados (~30%). Sin embargo, se observó que en los ESP tratados con AEA (1nM) o con Capsaicina (agonista específico de TRPV1, 1x10-7M) el ABC fue significativamente mayor al control (Control:1,73 ± 0,24; AEA:3,76 ± 0,86; Capsaicina:5,5 ± 0,58). El tratamiento con SR141716A (antagonista de CB1, 1x10-10M) o con Capsazepina (antagonista de TRPV1, 1x10-7M) revirtió el efecto de AEA. Además observamos que la incubación con La3+ (bloqueador de canales de calcio) previno el incremento de los niveles de calcio intracelular inducido por AEA ó capsaicina, sugiriendo que este incremento depende de la entrada de calcio extracelular. Conclusiones: Los resultados muestran que AEA, a través de la activación de los receptores CB1 y/o TRPV1, produce un incremento de calcio intracelular en una sub-población de ESP unidos a las CEO en bovinos y sugieren la participación de este endocannabinoide en las vías de señalización asociadas a la capacitación espermática en esta especie. Beca PLISSER PLC-379/2007, FONDECYT 1080679.