CEFYBO   02669
CENTRO DE ESTUDIOS FARMACOLOGICOS Y BOTANICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto del nitroxilo sobre el metabolismo del acido araquidónico, en plaquetas humanas.
Autor/es:
BERMEJO, E; SÁENZ, DA; ALBERTO, F; CHIANELLI, MS; POWAZNIAK, Y; ROSENSTEIN, RE; LAZZARI, M.A
Lugar:
Isla Margarita, Venezuela
Reunión:
Congreso; XXI Congreso Latinoamericano de Hemostasia y Trombosis; 2009
Resumen:
EFECTO DEL NITROXILO SOBRE EL METABOLISMO DEL ACIDO ARAQUIDONICO, EN PLAQUETAS HUMANAS.   E. Bermejo1, D. Sáenz2, F. Alberto1, M. Chianelli2,Y. Powazniak1, R. Rosenstein2, M.A. Lazzari1. 1-Hemostasia y Trombosis, IIHEMA, Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. 2-Departamento de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Argentina   Recientemente, se ha dedicado particular atención al estudio de los efectos biológicos de una forma rédox alternativa del NO, el nitroxilo (HNO). OBJETIVO: Analizar el efecto del HNO, en plaquetas humanas activadas con trombina (Tr)  sobre: 1-los niveles de aductos de malonaldehído-ácido tiobarbitúrico (TBARs)), 2-la formación de endoperóxidos cíclicos, 3-la producción de tromboxano B2 (TxB2) y 4-en marcadores de mecanismos de fosforilación (ERK1/2, p38MAP quinasa (p38) y Akt). MATERIALES y METODOS: Todos los experimentos se realizaron con plaquetas lavadas (PL) (300x 109 plaq/l). La sal de Angeli (SA) se utilizó como dador de HNO (10<micro>M). La agregación plaquetaria (ag) se realizó en paralelo según el método de Born. Se incubaron las PL con buffer o SA a 37ºC, durante 2 min. Luego, se indujo la agregación con Tr (0.5 o 2 U/ml) o con U46619 (1µM). Determinación de TBARS: Las PL se incubaron con buffer o SA a 37ºC por 30 min y luego se estimularon con 1 UI/ml de Tr. Los niveles de TBARs se determinaron por espectrofluorometría. Los resultados se expresaron en mM/mg de proteína. N=5 Determinación por cromatografía en capa delgada (TLC) de PGE2, PGF2a y TXB2: Las muestras se preincubaron durante 1 h a 37ºC con 3H ácido araquidónico. Luego con  buffer o SA y se activaron con 2 UI/ml de Tr. Se realizó TLC y se identificó las moléculas con estándares externos tritiados. N=3 Determinación de TXB2: Las muestras post incubación con buffer o SA se procesaron para EIA (Cayman Chemical Co). Los resultados se expresaron en ng/ 108 plaquetas. N=5 Las determinaciones para fosforilaciones por Western blots de ERK1/2, p38 y Akt se realizaron a 1 minuto o 10 minutos, con o sin Tr (0.1 U/ml), previa incubación de las PL con buffer o SA. Como control se utilizó niveles de b-actina. RESULTADOS: La SA inhibió la ag inducida por Tr (p < 0.01 test de Dunnett) y sólo la segunda ola de ag post estímulo con U44619. El HNO disminuyó los niveles de TBARs respecto al control (12.2±0.8 vs 6.6±0.6,p<0.05 test de Dunnett) y el porcentaje de conversión en PGF2α, PGE2 y TXB2 realizado por TLC. Los TXB2 disminuyeron respecto al control (128±6 vs 84±5,p< 0.01 test de Dunnett). La SA disminuyó: 24% y 48% en la fosforilación de p38 a 1 y 10 min respectivamente y un 28% en ERK1/2. La fosforilación en Akt se incremento en ambos tiempos. CONCLUSIONES: El nitroxilo inhibe la  retroalimentación y la consolidación del trombo plaquetario por varios mecanismos:1-acumulación de nucleótidos cíclicos (GMPc y AMPc) descripto en nuestros trabajos previos y 2-inhibiendo la vía ácido araquidónico. La disminución en la conversión de endoperoxidos cíclicos y en la generación de TXB2 confirma esta hipótesis y justifica la disminución en los mecanismos de fosforilación. Estos resultados aportan evidencias sobre la posibilidad terapéutica del HNO en enfermedades cardiovasculares.