Posible participación del calcio en el mecanismo de acción de la anandamida en la liberación de los espermatozoides del epitelio oviductal en bovinos

GERVASI MG, OSYCKA-SALUT C, LLADOS C, VILLALÓN M Y PEREZ-MARTINEZ S

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LIV Reunión de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas (SAIC); 2009

POSIBLE PARTICIPACIÓN DEL CALCIO EN EL MECANISMO DE ACCIÓN DE LA ANANDAMIDA EN LA LIBERACIÓN DE LOS ESPERMATOZOIDES DEL EPITELIO OVIDUCTAL EN BOVINOS Gervasi MG1, Osycka-Salut C1,  Llados C2, Villalón M2 y Perez-Martinez S1 Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFyBO-CONICET), Buenos Aires, Argentina. Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago de Chile, Chile. Previamente demostramos que tanto la anandamida (AEA) como su análogo estable (Met-AEA) promueven la liberación de los espermatozoides (ESP) de las células epiteliales del oviducto (CEO) mediante la activación de los receptores de cannabinoides CB1 y TRPV1. Asimismo demostramos que Met-AEA induce la capacitación espermática, siendo esta la posible causa de su liberación de las CEO. Dado que el aumento del calcio intracelular está asociado a la capacitación, estudiamos si la AEA induce este incremento en ESP bovinos en co-cultivo con CEO y si el calcio es necesario para la liberación de los ESP de las CEO. Se determinaron los niveles de calcio en ESP (cargados con FURA2-AM) en co-cultivo con CEO luego de la adición de agonistas cannabinoides. La medición se realizó mediante la adquisición de imágenes fluorescentes (F=340/380nm) seriadas. Los cambios en la fluorescencia, asociados a cambios en los niveles de calcio intracelular, se expresaron como área bajo la curva (ABC). La proporción de ESP que aumentó los niveles de calcio fue similar entre el control y los tratamientos (~30%). Sin embargo, en los ESP tratados con agonistas cannabinoides el ABC fue mayor al control (Control: 1,73±0,24; AEA: 3,76±0,86; Capsaicina: 5,5±0,58; p<0,05). Además se determinó el porcentaje de liberación de ESP unidos a las CEO en ausencia de calcio. Para ello, los ESP fueron pre-incubados con BAPTA-AM y luego colocados en co-cultivo. Se adicionaron agonistas cannabinoides y se contó el nº de ESP unidos a las CEO. Como control se repitió el experimento con ESP sin BAPTA-AM. El tratamiento con BAPTA-AM bloqueó el efecto dado por los agonistas cannabinoides ya que el porcentaje de ESP unidos a las CEO fue similar al control. (Control: 84,1±5,1%; AEA: 98,7±12,5%; Capsaicina: 98,7±4%). Los resultados indican que AEA produce un incremento de calcio intracelular en una sub-población de ESP unidos a las CEO siendo el calcio necesario para la liberación de los ESP del reservorio oviductal.