Determinación de parámetros de validación para la medida del cortisol en saliva por quimioluminiscencia

FERNÁNDEZ L; ARANDA C; ONETO A; KLOBERDANZ A; BEATTIE ME; REPETTO EM; TOMASSINI K; FABRE B

Buenos Aires

Congreso; XX Congreso de la Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo; 2017

Sociedad Argentina de Endocrinología y Metabolismo

INTRODUCCION: Por consenso el diagnóstico del Síndrome de Cushing se realiza a través de la medición de cortisol libre urinario, cortisol salival recolectado a las 23:00 hs (dos muestras) ó medición de cortisol sérico post 1 mg de dexametasona. La recolección de una muestra de saliva es sencilla, no invasiva y económica, y su análisis sería de elección a modo de screening para comenzar a estudiar poblaciones de riesgo con sospecha de la patología. OBJETIVO: Analizar la performance de una metodología quimioluminiscente automatizada (DXI-BC) para determinación de cortisol salival 23:00 hs, según las recomendaciones de las nuevas guías. MATERIALES Y METODOS: Efecto matriz: Se prepararon 6 curvas de calibración de 6 puntos, las que fueron generadas con un pool de salivas de 23:00 hs de 30 pacientes normales con valores de cortisol menores a 2,0 nmol/L. Las mismas fueron enriquecidas con calibradores provistos por el fabricante (concentraciones: 0,0 ; 5,5; 13.8; 27.6; 69,0; 165.5 nmol/L). Paralelamente se prepararon 6 curvas utilizando el diluyente comercial provisto por el fabricante. Las 12 curvas se procesaron por duplicado. Linealidad: Según EP06. Se preparó una curva de calibración con 6 calibradores de cortisol (rango: 0 a 165.54 nmol/L) utilizando saliva como matriz. Cada punto se procesó por duplicado. Límite de Blancos: Fueron analizadas 60 determinaciones de blancos, recopiladas retrospectivamente (2004 a actualidad). Limite de cuantificación: Según protocolo establecido por la guía EP17A2. Se calculó el Error total a partir de la elaboración de curvas de calibración utilizando saliva como matriz con 6 niveles de concentración de cortisol (rango: 0 a 165.54 nmol/L), procesadas por cuadruplicado, utilizando 2 lotes diferentes de reactivo. Recuperación: se tomaron 3 muestras de saliva de concentración menor al límite de cuantificación de cortisol, a las cuales se suplementó con 0,5; 5,5 y 55,2 nmol/L de cortisol. Cada determinación se analizó por triplicado. Perfil de imprecisión: Se realizó a partir de los datos de dispersión de 20 curvas de calibración que fueron adaptadas teniendo en cuenta el rango crítico de cuantificación: diluciones 1/10 de los calibradores 2 y 3 provistos por el fabricante (calibrador 2: 137,9 nmol/L; calibrador 3 275,9 nmol/L). Desempeño clínico: Se incluyeron 32 sujetos normales (23 hombres, 9 mujeres) y 6 pacientes con Síndrome de Cushing (2 hombres, 4 mujeres) de reciente diagnóstico y sin tratamiento.RESULTADOS: Efecto matriz: Se muestran las ecuaciones de las curvas obtenidas:
Ecuación de la curva con matriz: saliva: y = -1,824x + 3,491 Rango (IC 95%) = "-2,068 a -1,582" Ecuación de la curva con matriz: diluyente: y = -1,833x + 3,394. Rango (IC 95%) ="-1,961 a -1,704" . Se observa que hay solapamiento de los rangos de las pendientes de ambas curvas. Linealidad: Ecuación de la curva: y = -2,011x + 0,9888
R² = 0,9967; ensayo lineal entre 1,8 y 108,0 nmol/L. Límite de blancos: Se obtuvo un límite de blancos de 0,1 nmol/L. Dada la distribución no paramétrica de los datos obtenidos el LoB fue establecido como el percentilo 95 de la serie de repeticiones. Límite de cuantificación: 1,8 nmol/L, considerando un ETa de 25%. Perfil de imprecisión: Valores de los %CV según las concentraciones de los calibradores diluidos: Concentración 13,8 nmol/L CV=21%; Concentración 27,6 nmol/L CV=15%. Recuperación: La recuperación promedio de las muestras evaluadas fue : Adición de 0,5 nmol/L=120 . Adición de 5,5 nmol/L=115%. Adición de 55,2 nmol/L=102% Valores obtenidos de: Sujetos normales: Mediana de cortisol : 2,0 nmol/L y rango: < 2-9 nmol/L. Pacientes Cushing: Mediana de cortisol : 30,3 nmol/L y rango: 15.4-61.0 nmol/LCONCLUSIONES: El método utilizado ofrece una excelente performance analítica. La medición de cortisol en saliva de 23:00 hs por este método automatizado es la herramienta bioquímica más sencilla, rápida y económica tanto para estudiar a modo de screening a una población de mayor riesgo de padecer Síndrome de Cushing como para el diagnostico y seguimiento de la patología.