Estudio de la dinámica de activación de Rac por heregulina en células de cáncer de mama

LARA ANGELA; WERTHEIMER EVA; GONZALEZ AGUSTIN

Buenos Aires

Congreso; VII Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2017

Facultad de Ciencias Veterinarias- UBA

La activación de receptores ErbB por ligandos como heregulina (HRG) lleva a un aumento de la activación de Rac, una RHO-GTPasa ampliamente involucrada en procesos tumorales, y promueve migración en células de cáncer de mama. Los resultados de un microarray de cDNA mostraron que HRG induce la expresión de TGF2 en la línea celular cáncer de mama T47D. De hecho, las citoquinas de la familia de TGFestán implicadas en migración celular y metástasis. El objetivo de este trabajo fue estudiar la dinámica de activación de Rac que lleva a la migración de células de cáncer de mama inducida por HRG. Nuestra hipótesis de trabajo es que para que ocurra la activación de Rac, y la subsiguiente migración celular inducida por HRG, es necesaria la activación de distintas vías de señalización que convergen en Rac. Para desafiar nuestra hipótesis, se analizaron los niveles de activación de Rac en células T47D por ensayos de pulldown de Rac activado luego del agregado de HRG a distintos tiempos. A su vez, se analizaron los niveles de mRNA de TGF2 por PCR cuantitativa y se realizaron ensayos de cierre de surco para evaluar migración celular. Heregulina es capaz de inducir la activación de Rac con un pico a los 5 minutos que se mantiene hasta los 60 minutos. A partir de dicho tiempo, la activación disminuye significativamente hasta llegar a un 37% del basal a las 6 hs. Cuando HRG es removida del medio al cabo de 5 minutos de incubación (por lavado de las células y agregado de medio fresco), la activación de Rac a los 60 minutos se ve significativamente disminuida con respecto a un control de células mantenidas con HRG. Cuando HRG es removida a los 15 minutos, la remoción del medio condicionado no produce cambios con respecto al control en los niveles de activación de Rac. Sin embargo, la remoción del medio condicionado luego de 30 minutos lleva a la inactivación de Rac que no se recupera por el agregado de HRG exógena. Se determinó que la expresión de TGF2 aumenta significativamente luego de 30 minutos con HRG, alcanzando un pico a las 2 horas, al cabo de las cuales disminuye su expresión hacia las 6 hs de incubación. Además, TGF2 es capaz de inducir migración en células de cáncer de mama MFC7 de forma dosis-dependiente. Concluimos que HRG es necesaria durante los primeros 5 minutos para la activación inicial de Rac. Entre los 5 y los 15 minutos de incubación con HRG se desencadenan procesos que ya no dependen de la presencia de la misma para el mantenimiento de la activación de Rac. Sin embargo, pasados 15 minutos, las células producen factores que actúan de forma autocrina y que son necesarios para el mantenimiento de la activación de Rac iniciada por HRG. De hecho, HRG no es capaz de compensar la falta de dichos factores. La curva de tiempo de expresión de TGF2 reveló que existe una relación secuencial entre el pico de activación de Rac y el máximo de expresión de TGF2 inducido por HRG. Por lo tanto, proponemos que dicha citoquina podría ser necesaria para el mantenimiento de las funciones desencadenadas por HRG.