Protección funcional e histológica frente a la injuria isquémica inducida por el lipopolisacárido bacteriano en la retina de rata.

BORDONE, M.; FRANCO, P.; FERNANDEZ, D; SAENZ, D.; ROSENSTEIN, R.

Huerta Grande, Cordoba. Argentina.

Taller; X Taller Argentino de Neurociencias; 2008

X Taller Argentino de Neurociencias

Protección funcional e histológica frente a la injuria isquémica inducida por el lipopolisacárido bacteriano en la retina de rata. Melina P. Bordone, Pablo J. Franco, Diego C. Fernandez, Daniel A. Sáenz, Ruth E. Rosenstein. Laboratorio de neuroquímica retiniana y oftalmología experimental, Dto. de Bioquímica Humana, Facultad de Medicina, UBA. CEFyBO-CONICET.   Introducción. La isquemia es un componente central de diversas enfermedades retinianas, como la retinopatía diabética, la trombosis de la vena central de la retina e incluso el glaucoma, que constituyen las causas más frecuentes de ceguera irreversible. Al presente, no se dispone de estrategias eficaces para la prevención o terapéutica del daño isquémico retiniano. Frente a esta vacancia terapéutica, se ha sugerido como estrategia alternativa y/o complementaria, el uso de mecanismos endógenos de neuroprotección. El precondicionamiento isquémico (PI) es un mecanismo de resistencia transitoria frente a una injuria isquémica deletérea, que se produce como consecuencia de la aplicación previa de un insulto moderado/subletal y de corta duración. Se ha demostrado que el tratamiento con dosis subumbrales de lipopolisacárido bacteriano (LPS) reduce la injuria cerebral inducida por hipoxia-isquemia. Objetivos.  Analizar si el LPS induce el PI en la retina de ratas Wistar macho adultas y evaluar el rol de la óxido nítrico sintasa (NOS) en este mecanismo. Métodos. Se inyectó LPS (0.1, 1 y 5μg) intravítreo en un ojo y vehículo (solución salina) en el contralateral. Luego de 24 h, ambos ojos se sometieron a isquemia severa (por hipertensión ocular de 120 mm Hg durante 45 min.). El efecto de LPS per se, se evaluó como la concentración de proteínas y el número de células en humor acuoso a las 24 h  de la inyección. A los 7 días de la isquemia, se evaluó la histología y la función retiniana por electrorretinografía (ERG). Un grupo de animales recibió una inyección intraperitoneal de  L-NAME (50 mg/kg), inhibidor de la NOS, 30 min. antes de la inyección de vehículo o LPS. La actividad retiniana de NOS se determinó por la conversión de 3H-L-arginina a 3H-L-citrulina. Resultados. Luego de 24 h de inyección, las dosis de 1 y 5 μg de LPS, no así de 0.1 μg, indujeron un aumento significativo en los niveles proteicos y en el número de células en humor acuoso. Sin embargo, el efecto de 5 μg sobre ambos parámetros fue significativamente superior al de 1 μg de LPS. El LPS per se no afectó el ERG en ninguna de las dosis analizadas luego de 24 h de inyección. La isquemia de 45 min y la reperfusión por 7 días indujeron una disminución significativa en las amplitudes de las ondas a y b del ERG escotópico. Sin embargo, la disminución inducida por isquemia en la amplitud de ambas ondas: no se modificó en los ojos que recibieron 0.1 μg de LPS, fue significativamente menor en los tratados con 1μg de LPS (p<0.01), y significativamente más alta en los ojos que recibieron 5 μg de LPS (p<0.01). Además, los resultados histológicos (grosor de las capas celulares de la retina) indicaron que 1 mg de LPS protegió la morfología retiniana del daño inducido por isquemia. El L-NAME, que no tuvo efectos per se, inhibió el PI inducido por LPS (p<0.01). A las 24 h de la inyección de 1 o 5 mg de LPS la actividad de la NOS retiniana aumentó significativamente, sin embargo dicho aumento fue superior con 5μg. Conclusiones: Por primera vez, estos resultados indican que pequeñas dosis de LPS proveen protección frente al daño isquémico retiniano, probablemente mediante un mecanismo dependiente de la NOS.