NIVELES DE EXPRESION DE POTENCIALES BIOMARCADORES DE CANCER DE MAMA

LARA ANGELA; GONZALEZ AGUSTIN; WERTHEIMER EVA

CABA

Jornada; VI Jornadas de Jóvenes Investigadores en la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Buenos Aires.; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias- UBA

Debido a la alta incidencia del cáncer de mama, es de vital importancia identificar nuevos biomarcadores para una mejor estimación de la prognosis del paciente. P-Rex1, un Rac-GEF esencial para la activación de Rac1 y para la migración inducida por ligandos de receptores ErbB, es sobreexpresado en cáncer de mama. Los resultados de un microarray de expresión realizado en células T47D (línea celular de cáncer de mama humano), con P-Rex1 silenciado revelaron que la activación de receptores ErbB modifican los niveles de expresión de un alto número de genes involucrados en la progresión del cáncer de mama, en particular en procesos migratorios e invasivos. Es más, una parte importante del efecto gatillado por receptores ErbB depende de P- Rex1. Por lo tanto, P-Rex1 funcionaria como un regulador de los factores responsables de las propiedades migratorias e invasivas de las células de cáncer de mama dependientes de la activación de Rac a través de receptores ErbB. Con el fin último de analizar la relevancia de los resultados obtenidos en el microarray, el objetivo del trabajo fue el diseño y puesta a punto de primers específicos de PCR cuantitativa para distintos genes ?housekeeping? (actina y 18S) y para aquellos cuya expresión depende de HRG y P-Rex1 (como ser TGFb2 e IL6R). La puesta a punto se realizó con muestras de mRNA provenientes de células T47D control o estimuladas por 6 horas con 10 ng/ml de HRG. Luego de realizar la retrotranscripcion del RNA, se realizaron PCR cuantitativas con distintas concentraciones de cDNA (diluciones de 1/10 a 1/1000). Con los valores obtenidos se determinó la eficiencia de los primers basada en la pendiente de la ecuación de ajuste lineal del grafico de CT Vs concentración. Se obtuvieron primers con buena eficiencia (cercana al 100%) para TGFb2, IL6R y los ?housekeeping? actina y 18S. A su vez, se validaron los resultados del microarray de expresión para TGFb2. Nuestros resultados sugieren que los datos del microarray podrían ser validados por la técnica de Q-PCR. Es más, el aumento de los niveles mRNA de TGFb2 en T47D después del estímulo de HRG será utilizado como fundamento de futuros experimentos diseñados para determinar el rol de TGFb2 en la migración dependiente de HRG y P-Rex1 en cáncer de mama.