CEFYBO   02669
CENTRO DE ESTUDIOS FARMACOLOGICOS Y BOTANICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Nuevos blancos moleculares involucrados en la adquisición de la capacidad fecundante: participación del AMPc extracelular en la activación de vías de señalización asociadas a la capacitación espermática
Autor/es:
CARLOS AGUSTÍN ALONSO, CLAUDIA OSYCKA-SALUT, LUCIANA CASTELLANO, CARLOS DAVIO Y SILVINA PEREZ MARTINEZ.
Reunión:
Jornada; Jornada Básica Testículo y Espermatozoides Sociedad Argentina de Andrología; 2016
Resumen:
La capacitación espermática (CE) es un proceso necesario para que el espermatozoide (ESP) adquiera habilidad fecundante. Esta implica un intrincado diálogo molecular que incluye cambios en la remoción de colesterol de la membrana, aumento de Ca2+ y bicarbonato, producción de AMPc y activación de kinasas. Tradicionalmente, los niveles intracelulares de AMPc son modulados por la regulación de su síntesis y su degradación. Sin embargo, en otros tejidos, existe un tercer método de regulación que comprende la exclusión del nucleótido al espacio extracelular vía proteínas asociadas a resistencia a multidrogas (MRPs), particularmente, MRP4. A su vez, el AMPc extracelular es metabolizado a adenosina y desencadena eventos de señalización purinérgica mediante su unión a receptores de adenosina acoplados a proteínas G. En tal sentido, el objetivo de este trabajo es determinar la existencia de un sistema de exclusión de nucleótidos en el espermatozoide bovino criopreservado y definir su rol en la fisiología espermática y la CE. Los resultados muestran que el espermatozoide bovino expresa MRP4, y frente a concentraciones capacitantes de bicarbonato (40 mM) se detectaron niveles crecientes de AMPc en el sobrenadante a lo largo del tiempo. A su vez, la preincubación de las células con un inhibidor de MRPs, revirtió la capacitación inducida por bicarbonato. Sin embargo, la adición de AMPc extracelular no permeable (10 nM) rescató la inhibición. Posteriormente, se evaluó el rol del AMPc en la CE. La incubación con AMPc extracelular aumentó los porcentajes de capacitación, fosforilación en tirosina, hiperactivación y actividad mitocondrial. A su vez, emuló los efectos de la heparina en ensayos de fecundación in vitro y disminuyó el número de espermatozoides adheridos a un cultivo de células oviductales. Finalmente, se examinaron las vías de señalización activadas por el AMPc extracelular. La capacitación inducida por el nucleótido fue revertida en presencia de un antagonista específico del receptor A1 y un inhibidor de la PLC. Río abajo, se observó que la actividad de PKC y ERK-1/2 resultó crítica para este proceso, y que la incubación con AMPc aumenta los niveles de Ca2+ intracelular. Paralelamente, se evaluó la vía de sAC/PKA, y se determinó que ambas enzimas sufren una activación en presencia de AMPc, Ca2+ dependiente. Todos estos resultados demuestran la importancia de la exclusión de nucleótidos vía MRP4, y la señalización purinérgica en la fisiología espermática, reforzando su rol como factor autócrino/parácrino en la CE.