LA ANADAMIDA CAPACITA A LOS ESPERMATOZOIDES BOVINOS POSIBLEMENTE A TRAVÉS DE LA VIA DE ACCIÓN DE LA HEPARINA

GERVASI MG, PEREZ MARTINEZ S

Buenos Aires

Jornada; Primeras Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal -INITRA.; 2008

Facultad de Veterinaria UBA

LA ANADAMIDA CAPACITA A LOS ESPERMATOZOIDES BOVINOS POSIBLEMENTE A TRAVÉS DE LA VIA DE ACCIÓN DE LA HEPARINA. GERVASI MG y PEREZ MARTINEZ S.  Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (Facultad de Medicina, UBA-CONICET) La anandamida (AEA) es un mediador lipídico que participa en diferentes procesos reproductivos. Los niveles de AEA endógenos están regulados principalmente por la acción de la FAAH, enzima que degrada AEA. Previamente demostramos mediante un modelo in vitro de interacción espermatozoide-oviducto (ESP-CEO) en bovinos que concentraciones nanomolares [nM] de AEA o Met-AEA (análogo estable de AEA) inhiben la unión y promueven la liberación de los ESP unidos a las CEO a través de la activación de los receptores de cannabinoides CB1 y TRPV1. Considerando que la capacitación espermática es una de las posibles causas de la liberación de los ESP del epitelio oviductal, en el presente trabajo nos propusimos estudiar si la AEA actúa como un agente capacitante en bovinos y evaluar una posible relación con la vía que involucra a la heparina (conocido agente capacitante en bovinos). Para ello, se realizaron estudios de capacitación in vitro de ESP con concentraciones crecientes de Met-AEA. Luego de 45 min de incubación se observó, mediante la técnica de CTC, que la Met-AEA, solamente a [nM], produjo un aumento del n° de ESP con patrón B (capacitados) (t 0: 9,3±1,2%; t 45 Met-AEA [nM]: 23,9±3,2%; p<0,001). También se evaluó la inducción de la reacción acrosomal por LPC de los ESP capacitados con Met-AEA [nM] mediante la técnica de PSA-FITC. Los ESP capacitados con Met-AEA [nM] presentaron un 15% de patrón R (reaccionado) similar a los capacitados con heparina. Mediante la técnica de Western blot se encontró que tanto las CEO como los ESP bovinos expresan a la enzima FAAH. Para estudiar la posible relación entre las vías de heparina y AEA se midió la actividad de la FAAH en ESP capacitados con heparina (60µg/ml). Luego de la capacitación se produjo una disminución significativa de la actividad de FAAH respecto a los ESP no capacitados: (ESP no cap= 104,6±5,4; ESP cap= 74,7±6,7 nmolAA/mgprot*h; p<0,004) sugiriendo indirectamente un aumento endógeno de AEA. Luego se capacitaron ESP con heparina en presencia de antagonistas de los receptores CB1 y TRPV1. La presencia de los antagonistas en el medio inhibió la capacitación de los ESP por heparina (Hep: 18,1±3,9%; Hep+Ant-CB1: 9,9±3,1%; Hep+Ant-TRPV1: 7,5±1,9%; p<0,02). En conjunto, estos resultados sugieren que la AEA [nM] actúa como un agente capacitante en bovinos y que la vía de acción de la misma podría estar involucrada con la de la heparina.