MODULACIÓN DE LA SEÑALIZACIÓN A TRAVÉS DEL RECEPTOR MUSCARÍNICO M2 POR ANTICUERPOS CIRCULANTES DE PACIENTES CHAGÁSICOS CON DISAUTONOMÍA.

BELTRAME SP; AUGER SR; SABRA AH; BILDER CR; BAYONÉS L; WALDNER CI; GOIN JC

Corrientes

Congreso; Reunión Anual de SAFE; 2014

SAFE

Los anticuerpos anti-receptor muscarínico M2 (Ac anti-RM2) están fuertemente asociados a la presencia de disautonomía (D) en pacientes chagásicos crónicos (PCC). Sus niveles en circulación correlacionan positivamente con el grado de inhibición en la rama parasimpática de los PCC. En  este trabajo investigamos la capacidad de estos Ac para modular la señalización dependiente (SGD) e independiente (SGI) de proteínas G, estimuladas por el agonista farmacológico. SGD fue evaluada mediante luminometría, monitoreando el aumento de [Ca2+] intracelular en células HEK 293 expresando RM2, proteína Gαqi y Acuorina, luego del tratamiento con carbacol 10 µM.  Para el estudio de SGI se evaluó el reclutamiento de arrestina-2 (Arr-2) al RM2 mediante la metodología de BRET en células coexpresando RM2-RLuc y Arr-2-YFP tratadas con el agonista durante 20 min. En ambos sistemas se preincubaron las células durante 30 min a 25°C con concentraciones variables de las fracciones IgG de PCC con D (IgG CCD) o controles no infectados (IgG N). A diferencia de IgG N, IgG CCD inhibió tanto la señalización Gi-dependiente como el reclutamiento de Arr-2 al RM2, en forma dependiente de la concentración. Los fragmentos Fab derivados de ambas fracciones IgG resultaron inefectivos en ambos ensayos. Estos datos sugieren que los Acs anti-RM2 podrían participar en la fisiopatología de la D en PCC modulando los efectos del  agonista farmacológico sobre RM2, a través de un  mecanismo mediado por crosslinking de receptores.