PARTICIPACiÓN DE LA ENZIMA ÓXIDO NíTRICO SINTASA (NOS) y LA PROTEíNA QUINASA C ATIPICA (PKC) ZETA EN LA APOPTOSIS DE LINFOCITOS T MURINOS MEDIADA POR HORMONAS TIROIDEAS

ML BARREIRO ARCOS; H. STERLE; AJ KLECHA; C VERCELLI; AM FRANCHI; AM GENARO; GA CREMASCHI

Buenos Aires, Argentina

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la SAIC; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Las hormonas tiroideas (HTs) regulan la respuesta inmune y modulan la proliferación y diferenciación en varios tipos celulares, pero sus acciones directas sobre los linfocitos aún no han sido esclarecidas. Previamente demostramos in vitro que el cultivo a corto plazo (hasta las 72 hs) con HTs induce la división celular del linfoma T murino BW 5147 (BW) en estado quiescente. En este trabajo estudiamos las acciones de las HTs sobre las células BW cultivadas en presencia de tiroxina (T4) o triiodo-tironina (T3) por tiempos prolongados y las señales intracelulares desencadena­das. Después de los 5 dias de cultivo, las HTs inhibieron la proli­feración (%inh: 38.3±3.0, p<0.01) e indujeron apoptosis en la lí­nea celular, observado mediante tinción con Hoescht (%cél apopoptóticas vs control: >30%). La apoptosis celular fue corro­borada por la técnica de DNA ladder. Estos efectos fueron acom­pañados por un incremento en la actividad de NOS medida por conversión de [14C]-Arginina en [14C]-citrulina (Act. NOS (pmol 107cel), Basal: 95 ± 8.0 vs T4: 217 ± 19.1, p<0.01). Asimismo hemos encontrado por westem blot y por RT-PCR un incremento en los niveles proteicos y de ARN mensajero de iNOS y una dis­minución en los de la isoforma atípica PKCzeta. A tiempos pro­longados de cultivo, hemos hallado un incremento en las espe­cies reactivas de oxígeno (ROS) que fue determinado por con­versión de diclorofluoresceína-diacetato a su forma fluorescente (IFM, Basal: 10 ± 0.9 vs T4: 18 ± 1.6, p<0.01). Adicionalmente, las HTs indujeron un incremento en la nitrosilación de proteínas. Estos resultados muestran que la exposición prolongada de las células BW a las HTs lleva a un incremento exacerbado en la actividad de iNOS, que podría resultar en una disminución de la expresión de PKCzeta probablemente a través de la nitrosilación proteica. Estas señales intracelulares podrían disparar mecanis­mos apoptóticos a través de los cuales las HTs podrían regular la actividad linfocitaria.