CARACTERIZACION DEL SISTEMA ENDOCANABINOIDE EN ESPERMATOZOIDES Y OVIDUCTO BOVINO: POSIBLE ROL DE LA ANANDAMIDA (AEA) EN LA LIBERACIÓN DE LOS ESPERMATOZOIDES DEL EPITELIO OVIDUCTAL

GERVASI MG, RAPANELLI M, BILLI S, FRANCHI A Y PEREZ MARTINEZ S.

Buenos Aires

Congreso; XX REUNIÓN BIENAL DE LA ASOCIACIÓN LATINOAMERICANA DE INVESTIGADORES EN REPRODUCCIÓN HUMANA; 2007

Asociación Latinoamericana de Investigadores en Reproducción Humana

Los endocanabinoides participan en la regulación de diferentes procesos reproductivos en mamíferos. El útero y el oviducto contienen AEA, principal endocanabinoide, por lo que los espermatozoides posiblemente estén expuestos a AEA durante su pasaje a través del tracto reproductor de la hembra y module su capacidad fertilizante in vivo. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la participación de la AEA en la interacción espermatozoide-oviducto en bovinos. Para ello se investigó 1) la expresión de los diferentes subtipos de receptores (CB1; CB2; TRPV1) para endocanabinoides en espermatozoides y oviducto bovino, 2) la producción de AEA (por radioconversión) por el oviducto bovino 3) el efecto de la AEA en la interacción espermatozoide-oviducto in vitro. Se realizaron co-cultivos de espermatozoides (provenientes de semen bovino criopreservado) con células del epitelio oviductal (CEO), obtenidas a partir de folículos oviductales incubadas por 10 días en M199. Los resultados, utilizando las técnicas de RT-PCR, Western Blot e inmunocitoquímica, muestran que tanto el espermatozoide bovino como el oviducto expresan CB1 (281pb; 71 kDa/60kDa), CB2 (187 pb; 38 kDa) y TRPV1 (233 pb; 90 kDa). Los receptores se localizan en el acrosoma, segmento ecuatorial y cola del espermatozoide y en la membrana plasmática del oviducto. El oviducto bovino sintetiza AEA (3,5±0,7 y 0,5±0,2 nmol [14C]AEA/h/mg proteína en ampolla e istmo respectivamente). La incubación con AEA o Met-AEA (análogo estable de AEA) produjo una disminución de la unión de los ESP a  las CEO (Control: 70,4±7,8; AEA 10-9 M: 42,2±3,2; Met-AEA 10-9 M: 45,9±3,9 ESP/0,5 mm2; p<0,01). La incubación con SR141716 (antagonista de CB1) revirtió el efecto de AEA, mientras que SR144528, antagonista de CB2 no tuvo efecto. La incubación con 10-7 M de capsaicina (agonista de TRPV1) produjo una disminución significativa del nº de ESP unidos. Los co-cultivos fueron lavados para descartar los espermatozoides no unidos e incubados 15 min con Met-AEA. Estos resultados indican que la Met-AEA es capaz de despegar a los ESP del oviducto (40%; P<0,001). El sistema endocanabinoide está presente en el espermatozoide y oviducto bovino y la AEA (vía CB1 y/o TRPV1) podría estar actuando como una señal para la liberación del espermatozoide del oviducto para la fertilización.