CEFYBO   02669
CENTRO DE ESTUDIOS FARMACOLOGICOS Y BOTANICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La anandamida actúa como un inductor fisiológico de la liberación de los espermatozoides del oviducto en bovinos
Autor/es:
SILVINA PEREZ MARTINEZ, CLAUDIA OSYCKA, TOMAS FANTI, ADRIAN MUTTO, JULIANA BURDET, MARIA GRACIA GERVASI
Lugar:
Horco Molle
Reunión:
Jornada; XXX Jornadas Sociedad de Biología de Tucumán; 2013
Resumen:
La anandamida actúa como un inductor fisiológico de la liberación de los espermatozoides del oviducto en bovinos Silvina Perez-Martinez1, Claudia Osycka-Salut1, Juliana Burdet1, Tomás Fanti2, Adrian Mutto2 y María Gracia Gervasi1. (1) Laboratorio de Biología de la Reproducción en Mamíferos (CEFYBO-CONICET/UBA); Buenos Aires. (2) Laboratorio de Biotecnología Reproductivas y Mejoramiento Genético Animal (IIB-UNSAM) perezms@fmed.uba.ar El oviducto de mamíferos actúa como un reservorio funcional de los espermatozoides ya que la unión de los mismos al epitelio oviductal prolonga la vida media y retrasa la capacitación espermática, hasta que señales asociadas a la ovulación inducen su liberación permitiendo que ocurra la fecundación. Al llegar al oviducto, los espermatozoides toman contacto con las células epiteliales y con sus secreciones. Varios trabajos han puesto la atención en entender cuáles son los componentes del fluido oviductal y uterino que regulan los procesos relacionados con la función espermática y la fecundación. Algunas moléculas proteicas y glicosaminoglicanos presentes en el fluido oviductal bovino están involucradas en la regulación de la interacción espermatozoide-oviducto y en algunos casos en la capacitación espermática. Sin embargo, hasta el momento es escasa la información acerca de la participación de moléculas de origen lipídico en dichos procesos. La anandamida (AEA) es un mediador lipídico que mimetiza los efectos de los cannabinoides y actúa a través de los receptores de cannabinoides CB1 y CB2 y del receptor transiente y canal catiónico TRPV1. Previamente demostramos que la AEA induce la liberación de los espermatozoides de las células epiteliales del oviducto (CEO) a través de la activación de los receptores CB1 y TRPV1. Además, se sabe que las enzimas que degradan y sintetizan AEA (FAAH y NAPE-PLD, respectivamente) varían a lo largo del ciclo estral, sugiriendo una regulación hormonal sobre las mismas. En este trabajo se presentarán resultados relacionados con la evaluación de la regulación y el mecanismo de acción de la AEA en el proceso de selección oviductal de los espermatozoides. En primer lugar se caracterizó la principal vía metabólica de AEA durante el ciclo estral en el oviducto bovino. Si bien la expresión y localización de FAAH y NAPE-PLD no variaron entre los estadios, la concentración de AEA medida en el fluido oviductal fluctúa en el rango nanomolar y los mayores niveles intracelulares se encontraron en el estadio post-ovulatorio (p<0,05). Esto sugiere que las hormonas podrían estar modulando el camino metabólico de la AEA oviductal. Luego estudiamos la participación de las hormonas ováricas y su relación con la AEA en la interacción espermatozoide-CEO. Para ello  se realizaron experimentos de liberación de los ESP de las CEO incubando con estradiol (E) o progesterona (P) a diferentes tiempos. Las hormonas disminuyeron el nº de espermatozoides unidos a las CEO (p<0,05) y la incubación con antagonistas de CB1 ó TRPV1 revirtió el efecto del E (p<0,05) pero no el de P. Esto sugiere que la AEA estaría mediando el efecto del E en la liberación de los espermatozoides del oviducto. Además se estudió el mecanismo de acción de AEA en el proceso de selección oviductal de los espermatozoides. Dado que la capacitación es una de las causas de la liberación que se asocia con un aumento en los niveles de Ca2+i espermáticos, se investigó si la AEA participa en este evento. Los resultados indicaron que la AEA (1nM) favorece la capacitación a través de la activación de CB1 y TRPV1 (p<0,05) y la presencia de AEA en el medio de incubación incrementa la tasa de FIV de oocitos bovinos (p<0,05). Estudiamos además si la AEA induce cambios en la concentración de  Ca2+i en espermatozoides bovinos en co-cultivo con CEO. Para ello se determinó la concentración de Ca2+i en espermatozoides en co-cultivo con CEO y se observó que en los espermatozoides tratados con AEA (1nM), capsaicina (agonista específico de TRPV1; 0,1µM) o URB (inhibidor de FAAH, 5nM) la concentración de Ca2+ fue mayor a la observada en el control (p<0,05). Este efecto se revirtió con antagonistas de CB1 y TRPV1. Finalmente, se realizó un análisis funcional de los espermatozoides liberados con AEA. Los espermatozoides liberados con el endocannabinoide presentaron porcentajes de capacitación, reacción acrosomal y viabilidad similar a los controles. Sin embargo, la AEA liberó una mayor población de espermatozoides con motilidad progresiva. A partir de estos resultados, se propone que en el momento peri-ovulatorio, estímulos tales como las hormonas ováricas podrían inducir un aumento en la concentración de AEA oviductal. La AEA participaría en la regulación de la selección oviductal de espermatozoides incrementando la concentración de Ca2+ intracelular lo que favorece la capacitación espermática con la consecuente liberación de los espermatozoides del reservorio oviductal.