La exclusión de AMPc a través de MRP4 es necesaria para la capacitación espermática en bovinos: contribución de los receptores A1 purinérgicos (AR1)

CLAUDIA OSYCKA SALUT; FEDERICO DIEZ; JIMENA BURDET; MARIA GRACIA GERVASI; ANA MARÍA FRANCHI; LILIANA G. BIANCIOTTI; CARLOS A. DAVIO; SILVINA PEREZ MARTINEZ

Mar del Plata

Congreso; . LVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

279. (246) LA EXCLUSIÓN DE AMPc A TRAVÉS DE MRP4 ESNECESARIA PARA LA CAPACITACIÓN ESPERMÁTICAEN BOVINOS: CONTRIBUCIÓN DE LOS RECEPTORESDE A1 PURINÉRGICOS (A1R)Osycka-Salut C.1; Diez F.2; Burdet J.1; Gracia Gervasi M.1;Franchi A.3; Bianciotti L.4; Davio C.2; Pérez-Martinez S.1Laboratorio de Biología de La Reproducción en Mamíferos,Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos(CEFYBO)-CONICET, Universidad de Buenos Aires, BuenosAires, Argentina1 Laboratorio de Farmacología deReceptores, Departamento de Farmacología, Facultadde Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos AiresBuenos Aires, Argentina2; Laboratorio de Fisiopatología dela Preñez y el Parto, Centro de Estudios Farmacológicosy Botánicos (CEFYBO)-CONICET, Universidad de BuenosAires, Buenos Aires, Argentina3; Instituto de Inmunología,Genética y Metabolismo (INIGEM)-CONICET, Cátedra deFisiopatología, Departamento de Ciencias Biológicas, Facultadde Farmacia y Bioquímica, Universidad de BuenosAires, Buenos Aires, Argentina4.La capacitación espermática se correlaciona con cambiosestructurales y bioquímicos en el espermatozoide (ESP) queinvolucra, entre otros, un incremento en los niveles de AMPc. Asu vez, en otros tipos celulares, tanto en condiciones fisiológicasy patológicas el AMPc es excluído por proteínas de resistencia amultidrogas (MRPs), en particular MRP4, regulando la homeostasiscelular. El objetivo del trabajo fue estudiar la participacióndel proceso de exclusión de AMPc, vía MPR4, en el proceso decapacitación inducida por bicarbonato en bovinos. Se realizaronexperimentos de capacitación in vitro de ESP bovinos criopreservadosincubados con bicarbonato 40 y 70 mM, probenecid(inhibidor de MRPs), y DPCPX (antagonista de A1R). La evaluaciónde la capacitación fue realizada mediante las técnicas declorotetraciclina y de inducción de la reacción acrosomal por lisofosfatidilcolinaanalizada con la lectina PSA acoplada a FITC. Losniveles intra y extracelulares de AMPc fueron detectados medianteun ensayo de unión a PKA y posterior determinación de AMPc. Laincubación de los ESP con bicarbonato 40 y 70mM incrementó elpatrón capacitado de los ESP y los niveles de AMPc tanto a nivelintracelular como extracelular (p<0.01). El bloqueo farmacológicode MRPs con probenecid, incrementó los niveles intracelulares deAMPc en el ESP e inhibió la capacitación inducida por bicarbonato(p<0.01). A su vez, la incubación con AMPc incrementó el patróncapacitado de los ESP (p<0.01). Para evaluar el mecanismode acción del AMPc extracelular estudiamos la participación deA1R. El bloqueo de A1R disminuyó el efecto capacitante tantode bicarbonato como de AMPc (p<0.01). Por último, MRP4 selocaliza en la región post-acrosomal y en la cola del ESP. Losresultados sugieren que la exclusión de AMPc, posiblemente víaMRP4, y la activación de A1R, regulan eventos asociados a lacapacitación inducida por bicarbonato indicando por primera vezun rol parácrino/autócrino de AMPc en ESP bovinos.