CEFYBO   02669
CENTRO DE ESTUDIOS FARMACOLOGICOS Y BOTANICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la anandamida (AEA) como inductor fisiológico de la liberación de los espermatozoides (ESP) del ovidcuto (OVI) en bovinos
Autor/es:
GERVASI MG, OSYCKA-SALUT C, BURDET J, FRANCHI A Y PÉREZ-MARTÍNEZ S.
Lugar:
Rosario, Santa Fé.
Reunión:
Congreso; Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS) Reunión Anual 2012; 2012
Resumen:
El oviducto de mamíferos actúa como un reservorio funcional ya que la unión de los ESP al epitelio oviductal prolonga la vida media y retrasa la capacitación de los mismos, hasta que señales asociadas a la ovulación inducen su liberación permitiendo que ocurra la fecundación. Previamente demostramos que la AEA induce la liberación de los ESP de las células epiteliales del oviducto (CEO) a través de la activación de los receptores CB1 y TRPV1. Además, se sabe que las enzimas que degradan y sintetizan AEA (FAAH y NAPE-PLD) varían a lo largo del ciclo estral en roedores, dando idea de una regulación hormonal sobre las mismas. El objetivo del trabajo fue estudiar la regulación y el mecanismo de acción de la AEA en el proceso de selección oviductal de ESP. En primer lugar caracterizamos la principal vía metabólica de AEA durante el ciclo estral en el oviducto bovino. Si bien la expresión y localización de FAAH y NAPE-PLD no variaron entre los estadios, la concentración de AEA medida en el fluido oviductal fluctúa en el rango nM y los mayores niveles intracelulares se encontraron en el estadio post-ovulatorio (p<0,05). Esto sugiere que las hormonas podrían estar modulando el camino metabólico de la AEA oviductal. Luego estudiamos la participación de las hormonas ováricas y su relación con la AEA en la interacción ESP-CEO. Para ello realizamos experimentos de liberación de los ESP de las CEO incubando con E o P por 1, 2 ó 4h. Las hormonas disminuyeron el nº de ESP unidos a las CEO a las 2 y 4h (p<0,05). La incubación con antagonistas de CB1 ó TRPV1 revirtió el efecto del E (p<0,05) pero no el de P. Esto sugiere que la AEA estaría mediando el efecto del E en la liberación de los ESP del oviducto. Además se estudió el mecanismo de acción de AEA en el proceso de selección oviductal de ESP. Dado que la capacitación espermática es una de las causas de la liberación, estudiamos si la AEA participa en este evento. Los resultados indicaron que la AEA (1nM) favorece la capacitación a través de la activación de CB1 y TRPV1 (p<0,05). Ya que la capacitación se asocia al aumento en los niveles de Ca2+i estudiamos si la AEA induce estos cambios en ESP bovinos en co-cultivo con CEO. Para ello determinamos el Ca2+i en ESP en co-cultivo con CEO. La proporción de ESP que aumentó el Ca2+i fue similar en la población de ESP del control como en la de los tratados (~30%). Sin embargo, se observó que en los ESP tratados con AEA (1nM), capsaicina (agonista específico de TRPV1; 0,1µM) o URB (inhibidor de FAAH, 5nM) el Ca2+ fue mayor al control (p<0,05). Este efecto se revirtió con antagonistas de CB1 y TRPV1. A partir de estos resultados, proponemos que en el momento peri-ovulatorio, estímulos tales como las hormonas ováricas podrían inducir un aumento en la concentración de AEA oviductal. Este lípido regularía la selección oviductal de ESP induciendo un aumento en el Ca2+i y la capacitación espermática con la consecuente liberación de los ESP almacenados en el reservorio.