Participación de la PKA en la capacitación espermática inducida por anandamida en bovinos

CLAUDIA OSYCKA SALUT, MARÍA GRACIA GERVASI, JULIANA BURDET, CARLOS DAVIO Y SILVINA PÉREZ MARTÍNEZ

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2012

Previamente demostramos que la anandamida (AEA), principal endocannabinoide, induce la capacitación espermática en bovinos mediante la vía del óxido nítrico (NO). Por otro lado, durante la capacitación es necesaria la activación en el espermatozoide (ESP) de la vía que involucra a la PKA, entre otras. El objetivo del siguiente trabajo fue estudiar las participación de esta enzima en la modulación de los niveles de NO durante la capacitación espermática inducida por AEA, en bovinos. Dado que la activación de PKA es dependiente de AMPc, evaluamos la producción de este segundo mensajero en ESP bovinos incubados con AEA mediante un ensayo de unión a PKA y posterior dosage de AMPc. Los resultados sugieren un aumento de AMPc durante la capacitación inducida por AEA (p<0,05). Para evaluar la participación de PKA, se realizaron capacitaciónes in vitro con AEA y/o inhibidores de PKA (H89 y KT) en presencia de DAF-FM diacetato (fluoresce en presencia de NO). Se evaluó el estado de capacitación, mediante las técnicas de clortetraciclina e inducción de la reacción acrosomal por lisofosfatidilcolina y la producción de NO por citometría de flujo. Tanto H89 como KT inhibieron el efecto capacitante del endocannabinoide (p<0,05). A su vez, los niveles de NO disminuyeron en los ESP incubados con AEA y un inhibidor de PKA (p<0,05). Los resultados sugieren la participación de PKA en la activación de la vía del NO durante la capacitación espermática inducida por AEA en bovinos.