Regulación de marcadores de maduración y citoquinas proinflamatorias por activación muscarínica. Participación del óxido nítrico.

YUSEFF, FERNANDA; GRAZIANO, EZEQUIEL; SALES MARIA ELENA; LOMBARDI, GABRIELA

Buenos Aires

Jornada; X jornadas científicas Asociación de estudiantes por la Ciencia de la Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires (AECUBA),; 2012

X jornadas científicas Asociación de estudiantes por la Ciencia de la Facultad de Medicina de la Universidad de Buenos Aires (AECUBA),

El sistema colinérgico no neuronal (SCnN) está constituido por la acetilcolina (Ac) colina-acetil transferasa (CoAcT) y acetilcolinesterasa (ACE) enzimas que sintetizan y degradan a la Ac y por los receptores: nicotínicos y muscarínicos (M). Objetivo: Dado que previamente demostramos la presencia de receptores M3, M4 y M5 y de las enzimas ACE y CoAcT en células dendríticas(CD) humanas se investigó el efecto de la estimulación colinérgica sobre la expresión de los marcadores fenotípicos de maduración: HLA-DR y CD86 y la producción de citoquinas proinflamatorias como IL-12 y TNF-α en las CD. Materiales y métodos: las células se trataron con el agonista colinérgico carbacol (Carb, 10-8M) durante 1 h en presencia o ausencia del antagonista muscarínico atropina (AT, 10-8M). Luego se cultivaron 24 h en ausencia (CD inmaduras (CDi)) o en presencia (CD maduras (CDm)) de LPS 0,5 µg/ml. La producción de óxido nítrico(NO) se determinó midiendo la producción de nitrito (NO2-) en el sobrenadante de cultivo por el método de Griess; la expresión de marcadores de maduración por citometría de flujo, la producción de citoquinas por ELISA y la expresión de las isoformas de óxido nítrico sintasa (NOS) por Western blot (Wb). Resultados: el Carb incrementó la expresión de HLA-DR y CD86 en las CDm y la producción (pg/ml) de IL-12 (Carb: 575±10; basal: 374±15) y TNF-α (Carb:6733±1167; basal 3667±629)(n=3; p≤0,01 Carb vs. basal). Ambos efectos se redujeron en presencia de AT (10-7M). La NOS participa de la vía de señalización de los receptores M3 y M5 y su producto el NO es un mediador inflamatorio y regulador de la respuesta inmune. Se demostró que tanto las CDi como las CDm expresan las isoformas NOS1 y NOS3 por Wb que liberan concentraciones similares de NO2-(uM) (CDi:2,99±0,96; CDm: 1,98±0,51). El tratamiento con Carb sólo incrementó los niveles de NO2- (5,53±0,18, p<0,01) en las CDi. Conclusión: la estimulación colinérgica regula la expresión de los marcadores fenotípicos de maduración y la producción de citoquinas proinflamatorias en las CD humanas. Asimismo las CDi responden al agonista colinérgico aumentando la producción de NO, el cual podría ser un factor clave en el proceso de maduración.