Efecto de nitroxilo y óxido nítrico sobre el daño oxidativo plaquetario inducido por trombina.

BERMEJO, E; SÁENZ, D; CHIANELLI, M; LAZZARI, M; ROSENSTEIN, R

Buenos Aires, Argentina

Congreso; VII Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis, Grupo CAHT; 2006

Grupo CAHT, Grupo Cooperativo Argentino de Hemostasia y Trombosis

Múltiples evidencias experimentales avalan el rol del óxido nítrico (NO) en la regulación de la fisiología de plaquetas humanas. Recientemente, se ha dedicado particular atención al estudio de los efectos biológicos de una forma rédox alternativa del NO, el nitroxilo (HNO/NO-), que podría ser sintetizado por diversas reacciones bioquímicas, incluida la catalizada por a óxido nítrico sintasa (NOS). En trabajos previos, hemos demostrado que la sal de Angeli (SA) y el nitroprusiato de sodio (NSP) inhiben la agregación plaquetaria inducida por distintos agonistas y aumentan significativamente la acumulación de GMPc. El objetivo de este trabajo fue analizar, comparativamente, el efecto del HNO y el NO sobre el daño oxidativo en plaquetas humanas inducido por trombina. Para ello, se utilizó SA y NSP como dadores de HNO y NO respectivamente. La agregación plaquetaria se determinó con un agregómetro y la peroxidación lipídica plaquetaria se analizó por espectrofluorometría, a través de la determinación de los niveles de TBARS. Tanto la SA como el NSP inhibieron significativamente la agregación de plaquetas lavadas inducida por trombina (2 U/ml). La trombina indujo un aumento significativo en la peroxidación lipídica plaquetaria. Como se muestra en la Tabla, el NO y el HNO no afectaron per se la peroxidación lipídica plaquetaria aunque revirtieron significativamente el efecto de la trombina. El efecto antioxidante de ambos dadores fue reproducido por un análogo permeable de GMPc, el 8-Br-GMPc. En suma, estos resultados indican que el HNO y el NO inhiben la agregación plaquetaria a través de mecanismos antioxidantes, mediados por GMPc. Se ha demostrado que los niveles de TBARS en las plaquetas representan la cantidad de malonildialdehído formado por la enzima tromboxano sintetasa. Por lo tanto, estos resultados sugieren que el efecto anti-agregante del NO y el HNO  podría estar mediado por la inhibición de esta actividad enzimática. Tratamientos TBARS (nmol/mg prot) control 0.61  ±  0.1 SA 10 μM 0.58  ±  0.1 NPS 10μM 0.63  ±  0.1 Trombina 2 U/ml 12.2  ±  0.9** Trombina  + SA 10μM 8.55  ±  0.6a Trombina + NPS 10 μM 2.76  ±  0.2a Trombina + 8-BrGMPc 0.5 mM 6.15  ±  0.5a Test de Tukey; **: p< 0.01, respecto a control; a : p< 0.01, respecto a trombina. n= 4 en todos los casos.