Potenciación muscarínica del efecto del paclitaxel en células MCF-7. Vías de señalización implicadas

GUILLERMINA JACOB; MARÍA E. SALES; ALEJANDRO J .ESPAÑOL

Congreso; X Jornadas Científicas de AECUBA; 2012

La resistencia a la quimioterapia es crítica en el tratamiento del cáncer y la combinación de drogas antitumorales es una posibilidad para mejorar su efecto individual. Demostramos que el tratamiento prolongado con el agonista colinérgico  carbacol (CARB) promueve la muerte de células tumorales de mama humana MCF-7. Objetivos: investigar si la activación colinérgica potencia el efecto citotóxico del paclitaxel (PTX), una droga usada en el tratamiento del cáncer de mama y determinar las vías de señalización implicadas en este proceso. Materiales y métodos: La proliferación de células MCF-7 se cuantificó por el ensayo colorimétrico de MTT. La producción de óxido nítrico por la óxido nítrico sintasa (NOS) se evaluó con el método de Griess y la actividad de la enzima arginasa (Arg) se midió a través de la producción de urea. La expresión de proteínas se estudió por Western blot (Wb). Resultados: tanto el PTX como el CARB inhibieron la proliferación de células MCF-7 en forma concentración-dependiente. La combinación de concentraciones subóptimas de PTX (10-11M) y CARB (10-8M) inhibió la proliferación de células MCF-7 sin modificar la viabilidad de las células normales de mama MCF10-A. Este efecto se redujo por el pretratamiento con: atropina (AT) (10-5M), antagonista muscarínico; NCDC (10-5M), inhibidor de la fosfolipasa C o L-NMMA (10-4M), inhibidor de la NOS (p<0,001 vs. PTX+CARB) y se potenció con NOHA (10-4M) inhibidor de Arg o con IMD354 (5x10-6M) inhibidor de la vía del factor nuclear kB (NF-kB). En las células MCF-7 resistentes al tratamiento con CARB+PTX, observamos un aumento del 42±5% (p<0.01 vs. basal) en la actividad de NOS. Este efecto se revirtió al preincubar las células con AT, NCDC o L-NMMA y se potenció con NOHA o IMD354. El tratamiento con PTX+CARB incrementó la actividad de Arg en un 26±3% (p<0,01 vs. basal) y la expresión de ambas isoformas de Arg evaluado por Wb (p<0,001 vs. basal). Conclusiones: PTX+CARB potenciaron la citotoxicidad sobre células MCF-7 que ejerce cada droga por separado con participación del NF-kB. Este tratamiento incrementó la actividad de NOS y la expresión y actividad de Arg en la fracción de células resistentes al mismo.