Posibles vías de acción de la anandamida durante la capacitación espermática en bovinos

OSYCKA C; GERVASI MG; DAVIO C; PEREZ MARTINEZ S

Congreso; LVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas; 2011

Previamente demostramos que la anandamida (AEA), principal endocannabinoide, induce la    capacitación espermática en bovinos aumentando los niveles de óxido nítrico (NO). Es conocido que durante la capacitación se activan distintas vías moleculares en el espermatozoide (ESP) que incluyen al NO y a la proteína kinasa A (PKA) entre otros. El objetivo del siguiente trabajo fue estudiar las posibles vías de acción de AEA en la modulación de los niveles de NO durante la capacitación espermática en bovinos. En primer lugar, nos propusimos evaluar los receptores de cannabinoides (CB1 y TRPV1) involucrados en la producción de NO en ESP capacitados con AEA. Para ello se realizaron capacitaciones in vitro de ESP bovinos criopreservados con MetAEA (análogo no hidrolizable de AEA) en presencia de antagonistas de CB1 (SR1) o de TRPV1 (CZP) junto con la sonda DAF-FM diacetato (que fluoresce en presencia de NO). La fluorescencia se midió por citometría de flujo. El aumento de los niveles de NO observado al incubar los ESP con MetAEA, disminuyó en presencia de ambos antagonistas (p<0,05). Por otro lado, con el fin de dilucidar la participación de PKA en la capacitación inducida por AEA, se realizaron capacitaciónes in vitro en presencia de MetAEA y H89 (inhibidor de PKA). Se evaluó el estado de capacitación, mediante las técnicas de clortetraciclina e inducción de la reacción acrosomal por lisofosfatidilcolina (revelada con PSA-FITC), y la producción de NO por citometría de flujo. La incubación de los ESP con H89 inhibió el efecto capacitante del endocannabinoide (p<0,05). A su vez, los niveles de NO disminuyeron en los ESP incubados con MetAEA y el inhibidor de PKA (p<0,05). En conjunto, los resultados sugieren que la AEA activaría la vía del NO durante la capacitación espermática a través de los receptores CB1 y/o TRPV1 y que en este proceso estaría involucrada una PKA.