El efecto de compuestos amargos est¨¢ mediado por prote¨ªna Gi en gl¨¢ndula submaxilar murina.

DASSO M,; DIEZ RA,; BALDASERRONI E; CRIVELLI F; SALES ME

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2010

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La percepci¨®n del gusto amargo est¨¢ mediada por receptores T2R, expresados tanto en c¨¦lulas gustativas linguales como en el tracto gastrointestinal. La uni¨®n de ligandos amargos activa la prote¨ªna G gustducina (Ggust), cuya subunidad ¦Á estimula la adenilato ciclasa y/o fosfodiesterasas, mientras que el d¨ªmero ¦Â¦Ã activa a la v¨ªa de la fosfolipasa C (PLC) b2. Puesto que las gl¨¢ndulas salivales forman parte del aparato digestivo, investigamos la capacidad de los T2R para modular la secreci¨®n de amilasa, v¨ªa PLC, ¨®xido n¨ªtrico sintasa y guanilil ciclasa (GC) en gl¨¢ndula submaxilar murina (GSM). La expresi¨®n proteica se estudi¨® por Western blot (Wb), la actividad de amilasa por la t¨¦cnica de Bernfeld, la actividad NOS con el reactivo de Griess y la de GC por ELISA.  Observamos que tanto denatonio (DEN) ligando de T2R8, como cicloheximida (CICLO) agonista T2R5, inhiben la secreci¨®n de amilasa, siendo 10-5M la concentraci¨®n inhibitoria m¨¢xima (DEN: 48,1¡À3,49%; CICLO: 55,9¡À9,63%; vs. control sin tratamiento; p<0,001, n=3). El tratamiento conjunto con DEN y CICLO en concentraciones subumbrales result¨® en un mayor efecto inhibitorio de la secreci¨®n de amilasa (DEN10-9M+CICLO10-9M: 62,9¡À2,50% p<0,001, n=3), sugiriendo que las GSM expresar¨ªan al menos receptores de los subtipos 5 y 8 funcionales. Adem¨¢s, observamos un efecto an¨¢logo sobre la actividad NOS (DEN: 38,7¡À7,4%; CICLO: 59,7¡À4,4%; DEN10-9M+CICLO10-9M: 71,32¡À1,17%; p<0,001, n=3). Ambos compuestos amargos redujeron los niveles de  GMPc con respecto al control (DEN: 33,1¡À9,8%; CICLO: 58,4¡À9,8%; n=2). Este efecto inhibitorio ocurre probablemente por el acoplamiento de los T2R v¨ªa  prote¨ªna Gi  a la PLCb2 expresadas en la GSM, como lo demostramos por Wb, y a la ausencia de prote¨ªna G gust. Concluimos que las GSM poseer¨ªan m¨¢s de un tipo de T2R funcional y que la inhibici¨®n de la secreci¨®n de amilasa por compuestos amargos ocurrir¨ªa por activaci¨®n de la v¨ªa T2R-Gi-PLCb2-NOS-GC.