EFECTO INHIBITORIO DE LIPOSOMAS SOBRE EL CRECIMIENTO DE TRYPANOSOMA

DIBLASI, LORENA; HERMIDA, LAURA; PAVETO CRISTINA; ROSI PABLO

CABA

Congreso; XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGÍA; 2010

Asociacion Argentina de Microbiología

Código de Trabajo 27644 - DNI Profesional Responsable 24665687 Titulo y Autores EFECTO INHIBITORIO DE LIPOSOMAS SOBRE EL CRECIMIENTO DE TRYPANOSOMA CRUZI DIBLASI, LORENA(1); HERMIDA, LAURA(2); PAVETO, CRISTINA(3); ROSI, PABLO(1) (4) Datos Secundarios UNIDAD TEMATICA Microbiología Básica UNIDAD TEMATICA Microbiología BásicaMicrobiología Básica Texto Libre (1) Departamento de Ciencia y Tecnología - Universidad Nacional de Quilmes; (2) Laboratorio de Liberación Controlada - INTI; (3) Instituto de Investigación en Ingeniería Genética y Biología Molecular - CONICET; (4) Facultad de Farmacia y Bioquímica - IQUIFIB - UBA. INTRODUCCION El protozoario flagelado Trypanosoma cruzi en su estadío de epimastigote posee actividad endocítica, además esta forma replicativa puede cultivarse en condiciones de laboratorio en medio líquido por lo que es la más adecuada para estudiar la acción de liposomas (LP) en el crecimiento celular.Los LP son estructuras lipídicas capaces de encapsular diversos compuestos. Son ampliamente utilizados para vehiculizar compuestos polares a través de la membrana celular.Evaluar el efecto de liposomas con distintas composiciones lipídicas y distintos tamaños como inhibidores del crecimiento de epimastigotes, células endocíticas de Trypanosoma cruzi. Se prepararon suspensiones de fosfatidilcolina de huevo (EPC) y fosfatidilcolina de soja (SPC) a concentraciones finales de 13 mg/ml en búffer HEPES 10 mM pH=7,4 conteniendo: 100% SPC, 100% EPC y 50% EPC-50% SPC. Cada suspensión fue sometida a los siguientes tratamientos sucesivos: 1) disolución en HEPES; 2) sonicado por 60'; 3)extrusión 5 veces por membrana de acetato de celulosa de 800 nm de diámetro de poro (dp); 4) idem 400 nm dp; 5)idem 200 nm dp; 6) idem 100 nm dp; además se hizo una extrusión por membrana de 800 nm dp, sin sonicación previa.Luego de cada tratamiento se tomaron alícuotas de 2 ml para su uso en cultivos celulares. En todos los casos estas alícuotas fueron conservadas en atmósfera de N2 y a 8ºC. El tamaño de partícula en las suspensiones se determinópor Dynamic Light Scattering en un Malvern Zetasizer NanoS.Se observó que el origen de la fostatidilcolina utilizada en la obtención de los LP influye en la inhibición del crecimiento de epimastigotes. En el caso de la suspensión 100% EPC se observó un claro efecto inhibitorio correlacionado positivamente co el aumento de la concentración de LP. Por el contrario, los LP formados a partir de 100% SPC muestran un efecto inhibitorio máximo a concentraciones determinadas (0,16 mg/ml), por encima y por debajo de las cuales el efecto es menor. Los LP obtenidos a partir de 50% EPC- 50% SPC presentaron efectos sinérgicos positivos con un comportamiento similar al de LP 100% SPC. Cuando la suspensión original de los lípidos, sin sonicar ni extrudar, es probada, tanto 100% EPC, como 50% EPC-50% SPC muestran una clara actividad inhibitoria, mientras que 100% SPC no muestra actividad inhibitoria alguna en el rango de concentraciones evaluadas. La máxima acción inhibitoria fue detectada para LP de 100 nm de diámetro de composición 50% EPC-50% SPC.Trypanosoma cruzi en su estadío de epimastigote posee actividad endocítica, además esta forma replicativa puede cultivarse en condiciones de laboratorio en medio líquido por lo que es la más adecuada para estudiar la acción de liposomas (LP) en el crecimiento celular.Los LP son estructuras lipídicas capaces de encapsular diversos compuestos. Son ampliamente utilizados para vehiculizar compuestos polares a través de la membrana celular.Evaluar el efecto de liposomas con distintas composiciones lipídicas y distintos tamaños como inhibidores del crecimiento de epimastigotes, células endocíticas de Trypanosoma cruzi. Se prepararon suspensiones de fosfatidilcolina de huevo (EPC) y fosfatidilcolina de soja (SPC) a concentraciones finales de 13 mg/ml en búffer HEPES 10 mM pH=7,4 conteniendo: 100% SPC, 100% EPC y 50% EPC-50% SPC. Cada suspensión fue sometida a los siguientes tratamientos sucesivos: 1) disolución en HEPES; 2) sonicado por 60'; 3)extrusión 5 veces por membrana de acetato de celulosa de 800 nm de diámetro de poro (dp); 4) idem 400 nm dp; 5)idem 200 nm dp; 6) idem 100 nm dp; además se hizo una extrusión por membrana de 800 nm dp, sin sonicación previa.Luego de cada tratamiento se tomaron alícuotas de 2 ml para su uso en cultivos celulares. En todos los casos estas alícuotas fueron conservadas en atmósfera de N2 y a 8ºC. El tamaño de partícula en las suspensiones se determinópor Dynamic Light Scattering en un Malvern Zetasizer NanoS.Se observó que el origen de la fostatidilcolina utilizada en la obtención de los LP influye en la inhibición del crecimiento de epimastigotes. En el caso de la suspensión 100% EPC se observó un claro efecto inhibitorio correlacionado positivamente co el aumento de la concentración de LP. Por el contrario, los LP formados a partir de 100% SPC muestran un efecto inhibitorio máximo a concentraciones determinadas (0,16 mg/ml), por encima y por debajo de las cuales el efecto es menor. Los LP obtenidos a partir de 50% EPC- 50% SPC presentaron efectos sinérgicos positivos con un comportamiento similar al de LP 100% SPC. Cuando la suspensión original de los lípidos, sin sonicar ni extrudar, es probada, tanto 100% EPC, como 50% EPC-50% SPC muestran una clara actividad inhibitoria, mientras que 100% SPC no muestra actividad inhibitoria alguna en el rango de concentraciones evaluadas. La máxima acción inhibitoria fue detectada para LP de 100 nm de diámetro de composición 50% EPC-50% SPC.Dynamic Light Scattering en un Malvern Zetasizer NanoS.Se observó que el origen de la fostatidilcolina utilizada en la obtención de los LP influye en la inhibición del crecimiento de epimastigotes. En el caso de la suspensión 100% EPC se observó un claro efecto inhibitorio correlacionado positivamente co el aumento de la concentración de LP. Por el contrario, los LP formados a partir de 100% SPC muestran un efecto inhibitorio máximo a concentraciones determinadas (0,16 mg/ml), por encima y por debajo de las cuales el efecto es menor. Los LP obtenidos a partir de 50% EPC- 50% SPC presentaron efectos sinérgicos positivos con un comportamiento similar al de LP 100% SPC. Cuando la suspensión original de los lípidos, sin sonicar ni extrudar, es probada, tanto 100% EPC, como 50% EPC-50% SPC muestran una clara actividad inhibitoria, mientras que 100% SPC no muestra actividad inhibitoria alguna en el rango de concentraciones evaluadas. La máxima acción inhibitoria fue detectada para LP de 100 nm de diámetro de composición 50% EPC-50% SPC.