INGEBI   02650
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN INGENIERIA GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR "DR. HECTOR N TORRES"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Propagación de células madre embrionarias murinas en cultivo en un medio condicionado novedoso.
Autor/es:
LOSINO NOELIA; BOFFI JUAN C.; LUZZANI CARLOS; LOUIS TISSERAND MARIANA; FERNÁNDEZ DARÍO; SCASSA MARÍA E.; MIRIUKA SANTIAGO; BARAÑAO LINO; GUBERMAN ALEJANDRA S
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009
Resumen:
<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:EN-US; mso-fareast-language:EN-US;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Las células madre presentan un gran potencial para la medicina regenerativa, pero para su aplicación clínica aún hay que superar múltiples obstáculos, entre los que se encuentran su amplificación eficiente en estado indiferenciado y su diferenciación dirigida hacia el linaje deseado. Nuestros objetivos son estudiar el cultivo de diferentes líneas de células madre embrionarias murinas (mESC) en un medio condicionado (MC) novedoso que permite su propagación manteniendo sus propiedades esenciales, la identificación de los factores presentes en el mismo responsables de su actividad y los mecanismos moleculares involucrados. En mESC, la citoquina LIF activa al factor STAT3, implicado en la proliferación en estado indiferenciado. El MC permite la proliferación de la línea de mESC CGR8, sin el agregado de LIF. Las mESC cultivadas en MC presentaron morfología típica de colonia indiferenciada y expresaron marcadores específicos determinados por RT-PCR y/o inmunofluorescencia (Oct4, Nanog, Ssea-1, Ecat1, Rex1 y Klf4). Al inducir su diferenciación, formaron cuerpos embrioides que expresaron marcadores de diferentes linajes (Brachyury, a-fetoproteina, Mesp1 y 2, Isl1 y Miocardina). Estudiamos el efecto del MC en otras líneas mESC y detectamos la expresión de marcadores específicos. Por otra parte, mediante inmunofluorescencia, detectamos que las mESC CGR8 propagadas en MC presentaron a STAT3 desfosforilado, evidenciando un posible mecanismo alternativo. Asimismo, estudiamos el MC sobre las líneas embrionarias humanas (hESC) HUES-9, HUES-16 y S531. Estas mostraron morfología de colonias indiferenciadas y expresión de Oct4, detectado por inmunofluorescencia. Por otra parte, en la línea condicionadora detectamos por RT-PCR, la expresión de los factores IGF2 y FGF2, necesarios en el mantenimiento de las hESC pluripotentes. Los resultados sugieren que podría utilizarse el MC para propagar distintas líneas ESC, probablemente mediante mecanismos novedosos.