Localización subcelular de la fosfodiesterasa TcrPDEC2 y su rol en osmorregulación en Trypanosoma cruzi.

SCHOIJET A; DOCAMPO R; MIRANDA K; DE SOUZA W; TORRES HN; FLAWIÁ MM; ALONSO GD

Santa Fe. Santa Fe, Argentina.

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología.; 2009

Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, durante el cual, se debe enfrentar a cambios repentinos en su entorno. Un aspecto de particular relevancia es su habilidad para adaptarse a cambios extremos en la osmolaridad que ocurren dentro del insecto vector y a medida que el parásito se mueve hacia la célula hospedadora. El segundo mensajero AMPc posee una importante función en la osmorregulación en T. cruzi. Se ha demostrado que luego de someter a epimastigotes a un estrés hiposmótico, se produce una translocación de la aquaporina TcAQP desde los acidocalcisomas hacia el complejo de la vacuola contráctil (CVC), y que dicho tráfico es estimulado por análogos de AMPc e inhibidores de fosfodiesterasas (PDEs). Recientemente hemos caracterizado una fosfodiesterasa específica para AMPc en T. cruzi, denominada TcrPDEC2, la cual posee un dominio FYVE, el cual se encuentra involucrado en el direccionamiento hacia membranas ricas en fosfatidilinositol 3-fosfato (PI 3-P). Siguiendo con esta vía de señalización, también hemos clonado y caracterizado funcionalmente a TcVps34, la primer fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) identificada en T. cruzi. En el presente trabajo se describe un rol funcional de TcrPDEC2 en los procesos de osmorregulación en T. cruzi. Mediante ensayos de estrés hiposmótico se determinó que parásitos salvajes pre-incubados con inhibidores de TcrPDEC2 recuperan más rápidamente su volumen original en comparación a aquellos parásitos sin tratar; mientras que parásitos transgénicos que sobre-expresan TcrPDEC2 pre-incubados con estos inhibidores no mostraron diferencias en comparación a los parásitos control. Además, coincidiendo con su rol en osmorregulación, TcrPDEC2 mostró estar localizada en el espongioma de epimastigotes de T. cruzi, dentro del CVC. Cabe destacar además, que en parásitos transgénicos que sobre-expresan TcVps34 esta PDE se localiza no sólo en el CVC sino que también se distribuye en gránulos por todo el cuerpo del parásito, lo cual indicaría una posible interacción regulatoria entre ambas proteínas produciendo una deslocalización de TcrPDEC2 debido probablemente a un aumento en los niveles de PI 3-P intracelulares. Por último y con el fin de estudiar en mayor profundidad la relevancia del dominio FYVE de TcrPDEC2, demostramos que parásitos transgénicos carentes de dicho dominio no poseen actividad fosfodiesterasa. En conjunto, estos resultados muestran que TcrPDEC2 está involucrada en procesos fundamentales para la supervivencia de este parásito como lo es la osmorregulación, así como también postulan la importancia de su dominio FYVE para la funcionalidad de la enzima.