Clonado de StNDPK1, una nucleosido difosfato kinasa de brotes de Solanum tuberosum

BACHMANN SD; ULLOA RM

Rosario

Congreso; RedBio 2009; 2009

RedBio

Clonado de StNDPK1, una nucleosido di-fosfato kinasa de brotes de Solanum tuberosum Bachmann S.D,, Ulloa R. M. INGEBI-FCEN-UBA, Vuelta de Obligado 2490 2º - Capital Federal e-mail: bachmann@dna.uba.ar, rulloa@dna.uba.ar En plantas, los mecanismos de respuesta a estreses bióticos y abióticos están regulados por vías que dependen de la activación de genes tempranos. Las nucleosido difosfato kinasas (NDPKs) se han visto involucradas en respuesta a daño, estrés térmico, infección por patógenos, fitocromo A y la expresión constitutiva de AtNDPK2 en Arabidopsis confiere mayor tolerancia a estreses ambientales que involucran acumulación de especies reactivas de oxígeno (ROS). En plantas hay tres isoformas descriptas: NDPK1 (citosólica), NDPK2 (estroma de cloroplastos) y NDPK3 (lumen de cloroplasto y espacio intermembrana de mitocondria). El análisis sobre microarreglos de RNA de brotes de papa detectó diferencias significativas de expresión de genes con homología de NDPKs. Basándonos en los EST de éstos (STMED71, STMHO51, STMHY37) se diseñaron oligonucleótidos específicos para amplificar las isoformas de NDPK de S.tuberosum. Se realizaron ensayos de PCR usando DNA genómico o cDNA de hojas ó brotes de papa. Se amplificó un fragmento genómico de 1694 nt mientras que el obtenido a partir de cDNA de brote fue de 555 nt, pudiendo determinar las regiones intrónicas del gen. La secuencia genómica presentó un 92% de homología con NDPK VI de cloroplastos de Spinacia oleracea. Para completar la secuencia se diseñó un primer conteniendo un posible ATG sobre el EST y se realizó RACE 3´. La secuencia completa obtenida es de 1004 nts, con la región codificante comprendida en los primeros 717 nts. Además se midió expresión de ésta isoforma en distintos tejidos y en distintas condiciones de estrés.