DESARROLLO Y EVALUACION DE UN SENSOR ELECTROQUIMICO DE BASE APTAMERICA. MOLECULA MODELO: ADENOSINA

M. BELÉN PONCE, HELENA CERETTI, SILVANA RAMÍREZ, JAVIER M. MONTSERRAT

Bahía Blanca

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Los aptámeros son secuencias de ARN o ADN capaces de formar complejos muy selectivos con diversas moléculas blanco: péptidos, proteínas, o moléculas orgánicas pequeñas. Esta capacidad se ha aplicado en el desarrollo de sensores electroquímicos donde se utiliza un aptámero como capa de biorreconocimiento. Muy frecuentemente el anclaje del aptámero a la superficie del oro se realiza por medio de la modificación de su extremo 3´con un grupo tiol (enlace S-Au). Una alternativa atractiva, por su menor costo y mayor versatilidad sintética, consiste en el empleo de un grupo fosforotioato (Ts). El objetivo de este trabajo es presentar los avances en la construcción y evaluación de un sensor electroquímico de base aptamérica para adenosina. La inmovilización de la secuencia de ADN [1] modificada con Ts (oligoTs) fue evaluada por técnicas electroquímicas como voltametría cíclica y cronoculombimetría. Se correlacionaron los resultados obtenidos con otras técnicas de caracterización de superficies como XPS y radioquímicas empleando γ-32P. Las concentraciones superficiales del oligoTs resultan comparables con los datos de oligos tiolados (oligoSH) informados en bibliografía [2]. La capa de reconocimiento fue modificada por introducción de un grupo electroactivo; esto se realizó por síntesis in situ, incorporando un grupo ferroceno (Fc) en el extremo 5´ del oligo [3]. Las condiciones fueron optimizadas realizando la reacción en fase homogénea, evaluando la modificación por HPLC. La respuesta frente a adenosina fue cuantificada por voltametría de onda cuadrada.  La señal de Fc originada (Ep ~ 200mV vs Ag/AgCl KCl 3M) presenta respuesta lineal en el rango de concentraciones de 4-20 mM, y es dependiente del buffer empleado. Además se evaluó la estabilidad térmica del ensamblado y la recuperación de la señal luego de su exposición a buffer (regeneración). Comparativamente, empleando la misma metodología, se exploró la respuesta de la secuencia de ADN tiolada (oligoSH) que reconoce adenosina. Los resultados indican que la estrategia de inmovilización sobre oro a través del  grupo Ts y que la introducción del grupo electroactivo Fc son adecuados para su empleo en sensores electroquímicos de base aptamérica.     [1] Huizenga D.E., Szostak J.W., Biochemistry 34(1995) 656. [2] Herne T., M., Tarlov, M., J. Am. Chem. Soc. 119 (1997) 8916. [3] Takenaka S., Uto Y., Kondo H., Ihara T., Takagi M.,  Analytical Biochemistry 218 (1994) 436.