La invasión por Trypanosomacruzi, en cardiomiocitos HL-1, genera estrés oxidativo y activación del metabolismo de polímeros de ADP-ribosa

MARIA LAURA KEVORKIAN; SALOME VILCHEZ LARREA; SILVIA FERNANDEZ VILLAMIL

Santa Fe

Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2016

Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias

La Poli (ADP-ribosa) polimerasa 1 (PARP-1) es una enzima nuclear que puede activarse por rupturas en el ADN, vía ERK o aumentos en Ca2+.Al activarse, sintetiza polímeros de ADP-ribosa (PAR) sobre diferentes proteínas blanco, los cuales son degradados por la Poli ADP-ribosa glicohidrolasa (PARG). PARP-1 está involucrada en la reparación del ADN frente a daño genotóxico, producidos por agentes oxidativos, desafíos inmunológicos (LPS, IL-1) o la infección por patógenos. Ante una sobre-activación por daño excesivo, esta enzima puede conducir a la muerte celular o a la activación y persistencia de un proceso inflamatorio.El metabolismo de PAR es un modulador de la vía de señalización de NFkB y, así, de la generación de citoquinas pro inflamatorias.Nuestro objetivo es estudiar el papel de PARP en el proceso inflamatorio que se establece como respuesta ante la invasión por T. cruzien cardiomiocitosHL-1 en cultivo. Se evaluó la generación de estrés oxidativo y la activación del metabolismo de PAR generado frente a la infección, encardiomiocitos HL-1. Al estudiar la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) nucleares y citoplasmáticas se detectaron sólo ROS nucleares a las 2 y 48 horas post infección. Paralelamente, se evidenció la activación del metabolismo de PAR nuclear,en células HL-1, en el transcurso de la infección (1,2,4,48 y 72 hs), observándose un aumento en la producción de PAR por inmunofluorescencia y Western Blot.Considerando que la perturbación del metabolismo de ADP-ribosa afecta a los niveles de infección y de PAR en células Vero, se evaluó el efecto de los inhibidores de PARP-1 (Olaparib) y PARG (DEA) sobre las células HL-1,infectadas por 72 hs.Con respecto al control, se evidenció un aumento en la producción de PAR nuclear y en los niveles de infecciónal tratarlas con DEA (1 µM), mientras que no se observaron cambios con Olaparib (50 nM).El nivel de infección se midió utilizando parásitos transgénicos que sobreexpresan betagalactosidasa. Mediante el uso del anticuerpo anti 8-oxo-dG,no se encontró daño genómicoa los tiempos estudiados, por lo que se están evaluando otros métodos y condiciones, oconsiderando la posible activación de PARP por otras vías.Nuestros resultados son una primera aproximación a dilucidar el papel del metabolismo de PAR en la respuesta celular a la infección por T.cruzi en cardiomiocitos.