ANALISIS DE LA VARIABILIDAD GENETICA DE SECUENCIAS DE ADN SATELITE DE TRYPANOSOMA CRUZI

JUAN C RAMIREZ(1), ; ALEJANDRO G SCHIJMAN; MARÍA DE LOS A CURTO(3), ; CAROLINA TORRES(2),

Santa Fe

Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2016

SAP

Las poblaciones naturales de Trypanosoma cruzi han sido clasificadas en seis Unidades Discretas de Tipificación (UDTs, TcI-TcVI), asociadas con diferente distribución geográfica y ciclos de transmisión. Los marcadores utilizados para identificar las UDTs son de repetitividad moderada y sólo pueden ser aplicados a muestras clínicas con elevadas cargas parasitarias, con lo cual una elevada proporción de muestras de pacientes crónicos no pueden ser caracterizadas. Por esto, nos propusimos analizar la variabilidad genética de la secuencia de ADN satélite de T. cruzi, altamente conservada y repetitiva, con el objetivo de localizar patrones moleculares de tipificación de mayor sensibilidad. Se descargaron 141 secuencias de ADN satélite de T. cruzi del GenBank procedentes de cepas de TcI, TcII, TcIII, TcV y TcVI, y se clonaron y obtuvieron 188 secuencias de cepas con menor (TcI, TcII y TcVI) o nula (TcIV) representatividad en las bases de datos. Las secuencias fueron alineadas (ClustalX) y analizadas filogenéticamente (MrBayes), con el modelo evolutivo más apropiado acorde al Criterio de Información de Akaike (jModelTest). Se calculó la distancia genética entre los diferentes UDTs y agrupamientos de ADN satélite (Mega) y se investigó la presencia de patrones moleculares de acuerdo a la UDT y agrupamiento de procedencia de las secuencias satélite (VESPA). El árbol filogenético presentó tres agrupamientos basales. El primero agrupó todas las secuencias de las cepas TcI y TcIII analizadas, y algunas de TcV y TcVI. El segundo estuvo formado por las secuencias de las cepas TcII y la mayor parte de TcV y TcVI. Y el tercero incluyó exclusivamente las secuencias de las cepas TcIV. Se encontró una menor distancia genética entre las cepas de los UDTs I y III, y V y VI, y una mayor distancia entre cepas TcI y TcIII respecto a TcII; mientras las cepas TcIV fueron equidistantes del resto. Se logró identificar SNPs característicos de cada agrupamiento a partir de los cuales se podrá clasificar las secuencias satélite como tipo TcI/III, TcII, TcIV, o híbridos (TcV/VI). Los resultados de este trabajo permitirán tipificar muestras de pacientes crónicos con bajas cargas parasitarias y mejorar los métodos de diagnóstico molecular de T. cruzi basados en ADN satélite. A su vez, las relaciones filogenéticas encontradas aportan evidencias que contribuirán al estudio de la historia evolutiva de las diferentes UDTs.