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Las citocromo P450 reductasas dependientes de NADPH (CPRs) tienen un rol fundamental en las reacciones involucradas en los mecanismos de detoxificación de compuestos endógenos y xenobióticos y pertenecen a una gran familia de flavoproteínas que utilizan FAD y/o FMN como cofactores. Las CPRs catalizan la transferencia electrónica de NADPH a citocromo P450 (CYP), hemo oxidasa, citocromo b5 y escualeno epoxidasa. Recientemente hemos clonado y caracterizado tres putativas CPRs de T. cruzi: TcCPR-A, TcCPR-B y TcCPR-C. Sus secuencias aminoacídicas comparten un 11% de identidad, difiriendo parcialmente en su extremo amino-terminal, y presentan los dominios característicos de unión a FMN, FAD y NADPH. Las tres enzimas reducen al citocromo c en forma dependiente de NADPH. Mediante la utilización de los vectores de expresión no inducibles pTREX y pTEX-GFP, se han generado las siguientes construcciones: pTREX-TcCPR-B, pTREX-TcCPR-C y pTEX-TcCPR-C-GFP. Epimastigotes de la cepa CL Brenner de T. cruzi fueron electroporados con las mismas. Las dos primeras construcciones de sobreexpresión se integran al genoma del parásito, mientras que la de fusión a GFP se mantiene como episoma. Los parásitos transgénicos pTREX-TcCPR-B y pTREX-TcCPR-C han sido seleccionados y confirmada la presencia de las construcciones por Southern blot y su expresión por Northern y Western blot. Actualmente se está determinando comparativamente la resistencia a drogas tripanocidas y el estado redox. Los parásitos pTEX-TcCPR-C-GFP fueron observados por microscopia de fluorescencia, corroborando la expresión de dicha construcción. Al terminar la selección de los mismos, se podrá establecer la localización subcelular de la enzima TcCPR-C.