EL DOMINIO N-TERMINAL DE LA POLI (ADP-RIBOSA) POLIMERASA DE Trypanosoma cruzi ES RESPONSABLE DE LATRANSLOCACIÓN NUCLEAR ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO

MARIA LAURA KEVORKIAN; SALOME VILCHEZ LARREA; MIRTHA M. FLAWIA; SILVIA FERNANDEZ VILLAMIL

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

La Poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) juega un papel clave en las vías de reparación del ADN frente al daño genotóxico. Cumple su función, como homodímero, a través de la síntesis de polímeros de ADP-ribosa (PAR), modificando covalentemente diferentes proteínas. T.cruzi contiene una única PARP (TcPARP), la cual se localiza en el citoplasma. Ante el estímulo generado por estrés oxidativo, transloca al núcleo donde se evidencia la formación de PAR. A diferencia de otros organismos eucariotas, existen pocas descripciones de señal de localización nuclear (NLS) en tripanosomátidos. Con el fin de determinar la secuencia responsable de la acumulación nuclear de TcPARP, se transfectaron epimastigotes de T.cruzi con la proteína completa o diferentes combinaciones de dominios de la enzima, etiquetados con HA. Éstos últimos comprenden el N-Terminal (aa1-123123), WGR (aa 124-224) y región catalítica (aa 225-592). Tras realizar inmunofluorescencias en parásitos sobreexpresantes, se observó que la TcPARP completa recombinante tiene un comportamiento equivalente al de la enzima nativa. Aquellos parásitos que sobreexpresan fragmentos que incluyen el dominio N-terminal localizan en el núcleo, mientras que las construcciones que no presentan esta región generan parásitos con fluorescencia dispersa en el citoplasma. Este resultado fue independiente de la producción de daño genómico (H2O2 0.3M). De esta manera, demostramos que la secuencia comprendida en el N-terminal contiene la señal de localización ya que es la única capaz de dirigir el constructo al núcleo. Diferentes herramientas bioinformáticas postulan a TcPARP como una enzima nucleolar, lo cual coincidiría con la localización ya reportada para la PARP-1 y PARP-2 de mamífero. Se realizaron curvas de crecimiento para evaluar el efecto de la sobreexpresión de las diferentes proteínas truncas sobre el crecimiento del parásito, en condiciones estándar y tras la generación de daño oxidativo.