Regulación de la actividad supresora del silenciamiento post-transcripcional de la proteína TGBp1 del Potato virus X por fosforilación de la treonina 215

BINAGHI M, MÓDENA N., CONTE F., AND MENTABERRY A, ZELADA A.

Rosario, ARGENTINA

Congreso; XIII Reunión Latinoamericana, XXVIII Reunión Nacional de Fisiología Vegetal,; 2008

Asociación Argentina de Fisiología Vegetal

MULTIPLE REGULACIÓN DE LA PROTEÍNA TGBp1 DEL POTATO VIRUS X POR FOSFORILACIÓN DE LA TREONINA 215   M. Binaghi; N. Módena, F. Conte; A. Mentaberry y A. Zelada. (INGEBI-UBA-CONICET). Argentina. E-mail: binaghi@dna.uba.ar.   El Potato virus X (PVX, potexvirus) es un virus a ARN, cuyo genoma codifica una replicasa viral, tres proteínas de movimiento (TGBp1, TGBp2 y TGBp3) y la cápside viral (CP). Diferentes líneas de investigación sugieren que la fosforilación de las proteínas virales podría regular la replicación y la movilización viral. En nuestro laboratorio hemos demostrado que la proteína TGBp1 es fosforilada por una quinasa celular con características de caseína quinasa 2 (CK2) en los residuos Thr193 y  Thr215. El objetivo de este trabajo es evaluar el rol de la fosforilación en la Thr 215 sobre las distintas actividades biológicas de TGBp1. Para ello se construyeron distintas versiones mutantes de TGBp1, reemplazando la treonina por un residuo alanina o por un ácido aspártico. Ensayos de hidrólisis de ATP con proteína recombinante indicaron una disminución del 25% en la capacidad de hidrolizar ATP respecto a la TGBp1 salvaje. Por otro lado, observamos que la proteína mutante TGBp1-T215A es parcialmente defectiva como supresora del silenciamiento post-transcripcional (PTGS), mientras que la versión TGBp1-T215D tiene completamente afectada dicha función. En ensayos de infección con amplicones mutantes PVX-T215A se observó que la fosforilación de esta treonina es requerida para lograr una infección sistémica, y que el amplicón viral PVX-T215D es incapaz de producir una infección exitosa. El análisis de  la secuencia de TGBp1 de los viriones producidos en las hojas infectadas sistémicamente por el amplicón PVX-T215A mostró que el 100% de los viriones secuenciados reviertieron a alanina. Por último, al estudiar la localización subcelular de las distintas versiones mutantes encontramos que no hay modificaciones respecto a localización de la proteína salvaje. En función de estos resultados postulamos que la fosforilación de la treonina 215 regula negativamente la actividad ATPasa de la proteína TGBp1, y que esta podría explicar la causa de la incapacidad de los viriones mutantes para establecer una infección sistémica. Por otra parte, dado que los viriones que expresan la TGBP1-T215D no fueron capaces de infectar podemos postular que la regulación por fosforilación-desfosforilación es esencial para la infección viral.