Efecto de la proteína TGBp1 del Potato virus X sobre la regulación del desarrollo por miRNAs en plantas

CONTE F, MENTABERRY A, ZELADA A

Rosario, ARGENTINA

Congreso; XIII Reunión Latinoamericana, XXVIII Reunión Nacional de Fisiología Vegetal; 2008

Asociación Argentina de Fisiología Vegetal

Efecto de la proteína TGBp1 deL Potato virus X (PVX) sobre la regulación del desarrollo por miRNAs en plantas” Florencia Conte, Alejandro Mentaberry, Alicia Zelada Laboratorio de Agrobiotecnología, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina. fconte@fbmc.fcen.uba.ar TGBp1 es una proteína multifuncional requerida para la movilización de PVX, que posee actividad supresora del silenciamiento génico post-transcripcional (PTGS). Estudios previos de nuestro laboratorio demostraron que la sobreexpresión de TGBp1 en plantas de tabaco causa defectos en el desarrollo y alteraciones metabólicas. Fenotipos similares han sido reportados para otras proteínas supresoras del PTGS, como P19 y HC-pro demostrándose que dichos efectos son producidos por interferencia en la biogénesis de miRNAS. Los miRNAs son pequeños ARNs endógenos involucrados en la regulación de la expresión génica. Con el fin de determinar si TGBp1 interfiere con el desarrollo de la planta a través de un mecanismo que involucra la interacción con la vía de miRNAs, transformamos plantas de Arabidopsis thaliana y de Nicotiana benthamiana con el gen que codifica TGBp1. Obtuvimos 13 líneas transgénicas de A. thaliana y 5 líneas transgénicas de N. benthamiana. Las líneas trasngénicas fueron caracterizadas por PCR y Western blot. La mayoría de ellas presentaron alteraciones fenotípicas tales como enanismo, senescencia temprana y fertilidad reducida. Debido al reducido tamaño y a la baja fertilidad de las líneas con alteraciones más severas sólo se lograron establecer 6 líneas transgénicas de A. thaliana. Se analizó la expresión de los miRNAs 156, 160, 164 y 171 en plántulas de A. thaliana salvaje y transgénicas observándose una disminución general en los niveles de miRNAs comparados con las plantas control. En algunas de las líneas transgénicas de N.benthamiana  se observó una reversión parcial del fenotipo clorótico, el cual correlacionó con la inhibición de la expresión de la TGBp1. La línea incapaz de revertir es poco viable, altamente clorótica y de menor tamaño. En este momento nos encontramos determinando si esta inhibición de la expresión de TGBp1 es debido a un fenómeno de PTGS.