Aislamiento y estudio de la actividad hidrollítica de la fosfotriesterasa de Aspergillus niger

SANTILLÁN JULIA; MUZLERA ANDRÉS; LEWKOWICZ ELIZABETH; IRIBARREN ADOLFO

San Miguel de Tucuman

Simposio; Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO; 2015

REDBIO

Las fosfotriesterasas (PTEs; E.C. 3.1.8.1) constituyen un grupo de enzimas que catalizan la hidrólisis estereoselectiva de un gran número de compuestos organofosforados (OPs) pertenecientes a la familia de los triésteres. Estos compuestos son ampliamente usados como insecticidas (38% de los pesticidas en el mundo), presentando una elevada toxicidad por ser inhibidores de la acetilcolinesterasa y otras esterasas del sistema nervioso central. Las PTEs se han encontrado a lo largo de la escala evolutiva, desde bacterias hasta mamíferos, con excepción de los insectos, siendo las mejor caracterizadas las de Brevundimonas diminuta y Flavobacterium sp., y las paraoxonasas séricas humana y de conejo. En contraste con las PTEs bacterianas, las fúngicas no han sido estudiadas en profundidad; sin embargo cabe destacar que las PTEs de algunos hongos, como Aspergillus, Fusarium y Macrophomina son extracelulares, lo cual es una gran ventaja respecto de las PTEs bacterianas, que son enzimas de membrana.En estudios realizados previamente en nuestro laboratorio se seleccionaron diferentes cepas bacterianas con actividad PTE (Brevundimonas diminuta, Streptomyces, Nocardia y Arthrobacter). Con el objetivo de ampliar las fuentes de este grupo enzimático, para la aplicación en procesos de biorremediación de espacios contaminados (aguas o suelos), se propuso estudiar la actividad hidrolítica de la PTE de Aspergillus niger utilizando como sustrato metil paraoxon (MPO). Para ello se empleó el medio de cultivo saturado con y sin células para evaluar si la enzima es capaz de hidrolizar el sustrato propuesto y corroborar que sea extracelular. Se observó que utilizando el medio de cultivo sin células se obtuvo una actividad 6 veces mayor que en el medio de cultivo con células. Con estos resultados se comprobó que la enzima es extracelular y que tiene mayor actividad en ausencia del microorganismo. Además, se ha llevado a cabo el aislamiento de dicha PTE fúngica, y evaluado la actividad del crudo enzimático obtenido con el objeto de poder obtener un stock y facilitar el proceso biocatalítico.