Efectos de la Lipofección del Gen del Interferón-Beta sobre la Línea de Melanoma Humano M8

VILLAVERDE, MARCELA S.; GIL CARDEZA, MARÍA L.; GLIKIN, GERARDO C.; FINOCCHIARO LILIANA M.E.

Mar del Plata, Argentina.

Congreso; SAIC. LIII Reunión Anual.; 2008

Sociedad Agentina de Investigación Clínica

La terapia genética utilizando el gen del interferón beta humano (hIFNB) complejado con liposomas catiónicos (lipofección), proporcionaría una estrategia terapéutica más efectiva y menos tóxica para el tratamiento del melanoma. En una línea humana establecida a partir de este tumor (M8) nos propusimos a) determinar la respuesta citotóxica al tratamiento con hIFNB (utilizando el reactivo MTS) b) comparar este efecto con el de la proteína interferón humano recombinante (rhIFNB y rhIFNa). c) determinar la ubicación intracelular del hIFNB expresado (inmunofluorescencia) y d) evaluar morfología resultante (hematoxilina y eosina) y mecanismo de apoptosis/necrosis en las células lipofectadas (naranja de acridina, NA/bromuro de etidio, BEt). Luego de 5 días de lipofección con el gen hIFNB solo el 40% (respecto al control) de las células cultivadas en monocapa permaneció viable. Si bien los cultivos tridimensionales (esferoides) tuvieron una respuesta citotóxica significativa, presentaron una leve resistencia comparados a las monocapas. Por otro lado la respuesta al tratamiento con las proteínas recombinantes no alcanzó los niveles de efectividad logrados por transferencia genética, aún en las más altas concentraciones evaluadas (10000 UI/ml). La inmunocitoquímica del hIFNB mostró una localización citoplasmática y nuclear difusa post-tratamiento con rhIFNB, mientras el hIFNB expresado post-lipofección presentó zonas puntuales bien definidas de localización intranuclear. Además, la lipofección del hIFNB produjo alteraciones en la morfología de las células (aumento de citoplasma y núcleo) acompañadas de eventos apoptóticos/necróticos que se hicieron visibles mediante la doble tinción NA/BEt. En conjunto, estos resultados muestran que la efectividad antitumoral de la transferencia del gen de hIFNB es 100% mayor (p<0,05) a la de su propia proteína recombinante, probablemente por la presencia de mecanismos adicionales inherentes al proceso de lipofección y expresión.