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Muchos grupos de investigación se dedican en nuestro país al estudio de diversos aspectos del parásito causante del Mal de Chagas, Trypanosoma cruzi, sin embargo muy pocos invierten recursos económicos y humanos al desarrollo de nuevas herramientas moleculares. Esta deficiencia es una de las causas que retrasan el avance en el estudio funcional de genes de este parásito respecto a T. brucei por ejemplo. El sistema de clonado Gateway presenta una excelente oportunidad para trabajar una genómica funcional high-throughput con numerosos genes de interés. Nuestra red de laboratorios ha construido un ORFeoma parcial de T. cruzi en vectores de Entrada Gateway que pueden ser transferidos masivamente a vectores Destino. Sin embargo, carecemos de vectores Destino en Trypanosomas, lo cual vuelve al concepto de ORFeoma inutilizable. En consecuencia, encaramos la construcción de vectores destino Gateway. A partir de un plásmido de expresión en T. cruzi, pTREX A, se realizó la conversión al sistema Gateway (Invitrogen). Una vez logrado el vector destino pTREXGW se lo utilizó para transfectar 2 proteínas del orfeoma de T. cruzi como prueba de concepto, fusionadas a la proteína GFP en N-term y C-term a estadíos epimastigotes de T. cruzi. La expresión de estas proteínas fue determinada por microscopia de fluorescencia directa.. Por otro lado al vector pTREX A wt se le añadieron dos tags , HisG y Xpress desde el plásmido pRSET A. Luego de la fusión de los tags se convirtió al sistema Gateway para obtener pTREXGW- HisGX Destino. El objetivo de este vector es la rápida localización masiva de proteínas transfectadas. Este vector fue utilizado para transfectar 5 proteínas del orfeoma de T. cruzi a estadíos epimastigotes. Los resultados obtenidos serán presentados y discutidos.