INGEBI   02650
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN INGENIERIA GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR "DR. HECTOR N TORRES"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Mantenimiento y dinámica de la estructura de la cromatina en Trypanosoma cruzi. (Maintenance and dynamic of the chromatin structure in Trypanosoma cruzi)
Autor/es:
FERNANDEZ VILLAMIL SILVIA H; MEYER CRISTIAN; VILCHEZ LARREA SALOMÉ C; FASSOLARI MATÍAS; TORRES HECTOR N; FLAWIA MIRTHA M; ALONSO GUILLERMO D
Lugar:
Porlamar, Margarita- Venezuela
Reunión:
Congreso; XVIII Congreso Latinoamericano de Parasitología (FLAP); 2007
Institución organizadora:
Sociedad Parasitológica Venezolana
Resumen:
Trypanosoma cruzi posee un ciclo de vida complejo, durante el cual se enfrenta a cambios repentinos en su entorno, por lo que necesita regular la expresión de sus genes mediante mecanismos de respuesta rápida. En eucariotas superiores se han caracterizado mecanismos regulatorios que se basan en la modificación del estado de condensación de la cromatina, mediante la modificación post-traduccional de las proteínas asociadas. Las aurora quinasas, junto a la survivina, la borealina y el INCENP, constituyen un complejo de proteínas llamadas “pasajeras” que co-localizan y van cambiando su posición durante el ciclo celular. Las aurora quinasas se regulan por autofosforilación en un residuo de treonina (Thr-232) y una vez activas, son capaces de fosforilar, entre otras proteínas, a la histona H3. La poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP) es capaz de unir polímeros de ADP-ribosa a la aurora quinasa que, al ser modificada, pierde su actividad catalítica. Como consecuencia no se produce la fosforilación en serina 10 de la histona H3, deteniéndose la condensación del ADN y la progresión de la mitosis. El objetivo del presente trabajo es estudiar la conservación de este mecanismo regulatorio en tripanosomátidos, como así también su función en el metabolismo del ADN en T. cruzi. Se caracterizó la PARP de T. cruzi (TcPARP) en ensayos in vitro, la proteína recombinante fue activada en presencia de ADN mellado de manera dependiente de la concentración, fue capaz de modificar histonas, fue sensible a inhibidores específicos tales como 3-aminobenzamida y fue capaz de automodificarse regulando negativamente su actividad. Ensayos de inmunofluorescencia, utilizando anticuerpos anti polímero de ADP-ribosa demostraron que TcPARP se activa rápidamente cuando los parásitos son incubados en presencia de agentes que dañan el ADN (H2O2 3mM durante 10 minutos). Para avanzar en el estudio de este camino de señalización abordamos el estudio de tres homólogos de aurora quinasas (TcAUK1, 2 y 3) en T. cruzi. Los productos proteicos obtenidos por la expresión en E. coli fueron evaluados en ensayos de fosforilación in vitro. Por último, para estudiar la relevancia de la fosforilación en Thr-232, se realizaron mutantes en los que se reemplazó la Thr por un aminoácido cargado negativamente (Asp o Glu). Los resultados obtenidos ponen en evidencia un alto grado de conservación de los mecanismos de mantenimiento y remodelado de la cromatina en T. cruzi.