Histone deacetylase inhibitor Trichostatin A affects T. cruzi epimastigote stage growth rate

MEYER, C.G.; TORRES, H.N.; FLAWIÁ, M.M.; ALONSO, G.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XLIII Reunión Anual de SAIB; 2007

Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular

La regulación de la expresión génica en eucariotas superiores esta estrechamente relacionada con la modificación post traduccional de las histonas unidas al ADN. Las lisinas de las colas N-terminales de las histonas son acetiladas por las histona acetiltransferasas (HATs) y deacetiladas por las histona deacetilasas (HDACs). Previamente reportamos el clonado y expresión de dos secuencias con identidad HAT denominadas TcHAT1 y TcElp3. La expresión en epimastigotes fue confirmada por Northern blot pero hasta el momento no se pudo detectar actividad HAT. Es este trabajo presentamos enfoques alternativos para caracterizar estas proteínas. TcElp3 fue clonada en pYES2 y esta construcción se usó para transformar una cepa de levaduras DElp3. Las células transformadas no pudieron rescatar el fenotipo termosensible. También analizamos la expresión y localización de TcHAT1 y TcElp3 usando anticuerpos específicos obtenidos al inmunizar ratones con las proteínas recombinantes purificadas. Subsecuentemente analizamos el efecto de dos inhibidores de HDAC, Tricostatina A (TSA) y Butirato de sodio, sobre epimastigotes cultivados in vitro. Cuando los parásitos fueron tratados con 50 nM TSA se observó una marcada inhibición de la proliferación. Al analizar los parásitos tratados mediante citometría de flujo, se observó un pico sub G1 en el histograma de ADN. Estos datos no solo evidencian un mecanismo funcional de acetilación de histonas, sino que también ofrecen nuevos blancos para el desarrollo de drogas para el tratamiento del Mal de Chagas.