Caracterización de un homólogo del gen wee1 en tripanosomátidos

BOYNAK NY, ROJAS F, TELLEZ- IÑÓN MT

Chascomus, Buenos Aires

Congreso; -XXII Reunión Anual Sociedad Arg. de Protozoología y Enfermedades Parasitarias,; 2007

Sociedad Argentina de Protozoología

En levaduras o vertebrados la activación del complejo Cdc2 quinasa/ciclina B es un paso fundamental en la iniciación de la mitosis. Las quinasas de la familia Wee  incluyen a las proteínas Wee1 y Myt, que inactivan a Cdc2 por fosforilación. En tripanosomátidos no ha sido descripto la presencia de quinasas que modifican el complejo de CRKs: quinasas relacionadas a cdc2. Analizando la base de datos TIGR con secuencias de los genes correspondientes a la familia de proteínas Wee, se identificó en T. cruzi una secuencia de 1761 bp, que predice un producto de 586 aminoácidos (65 kDa). En T. brucei la secuencia identificada posee 1812 bp y un producto estimado de 603 aminoácidos (66.2 kDa). El porcentaje de identidad entre ambas secuencias es de 52 % y entre 20-30 % con Arabidopsis, S. pombe y humanos. El dominio catalítico de quinasas está altamente conservado en ambas especies y presenta todas las características de las quinasas Wee. El gen correspondiente a la putativa Wee de T. brucei se clonó en el vector de expresión pDEST17 con un tag de Histidinas en el N-terminal. Con la proteína purificada se obtuvo un anticuerpo policlonal en ratones. El anticuerpo reconoce a la proteína recombinante y a una proteína del peso esperado en extractos de T.cruzi y de T. brucei. Se estudiará la expresión de la misma en diferentes condiciones de cultivo en ambos parásitos.