Mecanismos Moleculares de la Respuesta Celular a la Lipofección del Gen de Interferon-B

VILLAVERDE, MS; KRAWIEC, L; GIL CARDEZA, ML; GLIKIN, GC; FINOCCHIARO LME

Mar del Plata

Congreso; SAIC. LII Reunion Anual; 2007

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

El tratamiento por transfección del gen del interferón beta humano (hIFNb) complejado con liposomas catiónicos (lipofección), proporciona una novedosa estrategia terapéutica para el sarcoma de Ewing. En una línea derivada de este tumor (EW7) investigamos los efectos citotóxicos de la lipofección del gen hIFNb mediados por: a) la producción de especies oxidantes (método colorimétrico y luminómetro) b) los niveles citosólicos de un inhibidor de  peroxidasas: inositol fosfoglicano (IPG) (método enzimático), y su posible correlación con: a) el mecanismo de apoptósis/necrosis (citometría de flujo, tinción con naranja de acridina/bromuro de etidio), b) la expresión del gen oncosupresor p53 (imunofluorescencia y western blot) y c) la inducción de senescencia (reacción citoquímica). El análisis por citometría de flujo mostró una compleja respuesta a la lipofección con el gen hIFNb: mientras que al día 2 se observa acumulación de células en la región hiperploide sugiriendo una re-entrada en fase S sin división celular, al día 5, el 87% se acumula en la región apoptotica sub-G1, sugiriendo apoptosis luego de un prolongado bloqueo mitótico. A los 7 días post lipofección las células tratadas superaron el 50% de senescencia (control <8%). La relación de células apoptóticas/necróticas fue >1 a tiempos cortos de tratamiento y <1 a tiempos prolongados. Por otro lado, la lipofección del hIFNb aumentó la actividad inhibitoria de peroxidasas (40%, p<0,02), y, en consecuencia los niveles de hidroperóxidos (2,3 veces; p<0,02) y otras especies oxidantes (2,5 veces; p<0.05). El agregado exógeno de IPG al control mimetizo estos efectos. La proteína oncosupresora p53 aumentó tanto en citoplasma como en núcleo. Los resultados muestran que el tratamiento con el gen hIFNb promueve un aumento de especies oxidantes y del p53. Esto lleva a alteraciones nucleares que afectan la división celular conduciendo a la muerte por apoptosis y/o necrosis y una senescencia precoz asociada al daño oxidativo.