Obtenci¨®n y caracterizaci¨®n de anticuerpos recombinantes derivados de bibliotecas combinatoriales de pacientes con Cardiopat¨ªa Cr¨®nica de Chagas (CCCh) contra ant¨ªgenos de Trypanosoma cruzi

GRIPPO V, NIBORSKI L, RAATS J, LEVIN MJ.

Chascomus, Buenos Aires

Congreso; XXII Reuni¨®n Anual de la Sociedad Argentina de Protozoolog¨ªa; 2007

Sociedad Argentina de Protozoologia

La complejidad de la respuesta humoral anti-Trypanosoma cruzi (T.cruzi) nos llev¨® a construir bibliotecas combinatoriales de anticuerpos (Acs) de distintos pacientes con CCCh. A partir de m¨¦dula ¨®sea de pacientes, se prepar¨® ARN total y se sintetiz¨® el ADNc. Se amplificaron las regiones variables (VH, V¦Ê y V¦Ë) y  se clonaron en el fag¨¦mido pHen. De esta forma, se obtuvieron los fragmentos de Acs (scFv) completos y se electroporar¨®n en la cepa E.coli TG-1. El rastreo de la biblioteca se realiz¨® por ¡°phage display¡± contra lisado total de epimastigotes de T.cruzi. Se obtuvieron clones reactivos contra lisado total de T.cruzi por ELISA. La diversidad de los mismos se analiz¨® por digesti¨®n con la enzima de restricci¨®n BstNI y secuenciaci¨®n. Un grupo de Acs pertenecientes a la familia VH 3-30*18 reaccion¨® con una prote¨ªna de m¨¢s 175 Kda en Western blot de epimastigotes de T.cruzi. La misma prote¨ªna es reconocida por el suero del paciente del que se derivo la biblioteca. La reactividad de estos Acs se evidencio tambi¨¦n por inmunofluorescencia indirecta contra el par¨¢sito. Este trabajo presenta la primer caracterizaci¨®n de Acs recombinantes humanos contra T.cruzi. Estos podr¨ªan constituir una herramienta fundamental para el estudio de la enfermedad.