INGEBI   02650
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN INGENIERIA GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR "DR. HECTOR N TORRES"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterizacion molecular de StCDPK2. Su expresión bajo estimulos de luz y GAs,
Autor/es:
VERÓNICA GIAMMARIA; PABLO GARGANTINI; RITA M. ULLOA
Lugar:
Chascomús, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; XII REUNION de Fisiologia Vegetal, RAFV; 2006
Institución organizadora:
SAFV
Resumen:
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE StCDPK2 . SU EXPRESIÓN BAJO ESTÍMULOS DE LUZ Y  GAS   Verónica Giammaria, Pablo Gargantini, y Rita M Ulloa INGEBI-CONICET. Vuelta de Obligado 2490 2do piso (1428) -Buenos Aires.  Email: giammaria@dna.uba.ar   Las plantas dependen absolutamente de su ambiente y utilizan señales externas para iniciar eventos específicos de su desarrollo. En plantas, las quinasas de proteínas dependientes de Ca2+ e independientes de calmodulina (CDPKs) son elementos claves en la señalización del calcio. Este proyecto intenta comprender el papel de las CDPKs, en procesos de desarrollo, así como su participación en la percepción de señales ambientales y hormonales. En nuestro laboratorio se clonó la isoforma StCDPK2 a partir de una biblioteca de expresión de estolones tuberizantes. El análisis de la secuencia aminoácidica de StCDPK2 (515 aa) mostró la presencia de todos los dominios característicos de las CDPKs. Se hicieron ensayos de transcripción y traducción in vitro y se obtuvo una banda del peso molecular esperado (57 Kda) correspondiente a la proteína StCDPK2. El extremo amino terminal variable de StCDPK2 presenta un posible consenso de miristoilación (MGXXXS).Para determinar si este consenso era funcional se realizaron ensayos de purificación de los productos traducidos in vitro utilizando una resina fenil-sefarosa. Los resultados obtenidos  permiten suponer que el consenso de miristoilación podría ser  funcional. Se ensayó la actividad  de la proteína traducida  in vitro, esta presentó características de una CDPK funcional; la fosforilación de  Syntide-2 en presencia de Ca2+  y su actividad fue inhibida en presencia de EGTA. Se realizaron ensayos de Western Blot, utilizando los productos de la  reacción de traducción in vitro,  se utilizó un anticuerpo anti-CDPK1 de Medicago sativa. El ensayo dió una banda del peso esperado (57 Kda), que coincide con el peso molecular de la StCDPK2. Datos de Northern blot y RT-PCRs demuestran  StCDPK2 se expresa en diferentes tejidos de la planta. StCDPk2 presenta un patrón de expresión espacio-temporal diferente durante la brotación del tubérculo de papa,  y responde diferencialmente ante estímulos de luz-oscuridad y la presencia de giberelinas.