Diseño de una metodología de screening de fosfotriesterasas bacterianas y su evaluacion en la degradacion de organofosforados

JULIA Y. SANTILLÁN; LUCAS A. DETTORRE; ELIZABETH S. LEWKOWICZ; ADOLFO M. IRIBARREN

Mar del Plata

Simposio; XIX Simposio Nacional de Química Organica; 2013

SAIQO

Los compuestos organofosforados (OP) son utilizados como insecticidas comúnmentes utilizado en la agricultura, estando su toxicidad asociada a la inhibición de la acetilcolinesterasas y otras esterasas del sistema nervioso. En consecuencia las enzimas que degradan dichos OPs, denominadas fosfotriesterasas (PTEs), ofrecen aplicaciones en el tratamiento de intoxicaciones, en la biodegradación y biorremediación de estos compuestos1,2. En la actualidad se han hallado PTEs en mamíferos, peces, aves, moluscos y bacterias. Sin embargo, las más estudiadas son las provenientes de Brevundimonas diminuta y Flavobacterium sp. y las paraoxonasas séricas humana y de conejo3. En este sentido, el presente trabajo plantea una metodología de screening aplicada a una colección completa de microorganismos para la obtención de nuevas fuentes bacterianas de PTEs. Dicho screening se llevó a cabo en medio de cultivo sólido basado en la hidrólisis de un sustrato fluorogénico, el coroxón. A partir de aquellos microorganismos que resultaron positivos, se evaluaron en medio de cultivo líquido diferentes sustratos OPs tales como: metil y etil paraoxón, metil paratión y coroxón. También se analizaron diferentes condiciones de la reacción hidrolítica variando pH, temperatura y concentración de sustratos. La metodología diseñada permitió hallar cepas con actividad PTE de los géneros Arthrobacter, Nocardia y Streptomyces. Tras la evaluación frente a los diferentes OPs se lograron obtener cepas que poseían mayor actividad respecto de B. diminuta, como Streptomyces phaeochromogenes y Nocardia asteroides