Los polimeros de ADP-ribosa intervienen en el ciclo celular de Trypanosoma brucei

SCHLESINGER M; VILCHEZ LARREA SALOMÉ C; FLAWIA MIRTHA M; FERNANDEZ VILLAMIL SH

Rosario

Congreso; XXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2013

Sociedad Argentina de Protozoología

Las poli(ADP-ribosa)polimerasas (PARPs) catalizan la formación de polímeros de ADP-ribosa (PAR), fundamentalmente en respuesta a rupturas en el ADN. La unión covalente de PAR a sus proteínas blanco modifica su actividad y afinidad por otras proteínas o el ADN. Los PAR son luego degradados por la enzima poli(ADP-ribosa)glicohidrolasa (PARG). En contraste con lo que se ha reportado para el humano (17 PARPs), T.brucei presenta una única TbPARP y  TbPARG. El objetivo del presente trabajo es estudiar el metabolismo de PAR relacionado con procesos metabólicos en los que tienen lugar rupturas transitorias en el ADN como las que ocurren durante el ciclo celular. Utilizando el vector p2216 obtuvimos parásitos procíclicos que sobreexpresan TbPARP, demostrado por Southern blot y Western blot. La inducción de la sobreexpresión de TbPARP no modificó la morfología de los parásitos vistos al MO, sin embargo estos mostraron un retraso en su crecimiento (50% menor al día tres post inducción con tetraciclina). Comparando cultivos sincronizados con HU de dichos parásitos observamos un retraso en la fase S del ciclo celular respecto al control sin inducir. PARP está regulada negativamente por automodificación y dicho proceso es revertido por PARG. Parásitos procíclicos RNAi PARG también mostraron un retraso en el crecimiento comparado con el control, sugiriendo que el metabolismo de PAR tendría un papel en el ciclo celular. Demostramos tanto por IFI como con parásitos transgénicos que sobreexpresan TbPARP fusionada a YFP, que contrariamente a otros organismos, esta enzima presenta localización citoplasmática y migra hacia el núcleo cuando existe daño en el ADN. Por otro lado, la localización subcelular de TbPARG también difiere con la observada para otras PARGs estudiadas, ya que en T.brucei es siempre nuclear, independientemente de la existencia de ADN nickeado. La localización y expresión de TbPARP y TbPARG fue estudiada durante el ciclo celular y en diferentes estadios del parásito